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小檗碱对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smad通路的影响
作者姓名:姚璐  张秀丽  赵越  张萍  王雪梅  池志宏
作者单位:中国医科大学科学实验中心;中国医科大学细胞生物国家重点实验室;本溪市中心医院肾内科;辽宁医学院组胚教研室;中国医科大学附属口腔医院修复科;中国医科大学病理生理教研室
基金项目:国家自然科学基金(81170561);辽宁省自然科技计划基金(2012408002,2013225090);中国博士后科学基金(2014MM551144)
摘    要:目的研究小檗碱(BBr)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化(EMT)及TGF-β/Smad通路的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:1正常对照组;2TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);3小檗碱作用组(30μM小檗碱作用24h后加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western Blot方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Smad2、Smad3、磷酸化的Smad2、3(P-Smad2、3)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况。结果 TGF-β1处理可导致NRK-52E细胞的α-SMA蛋白表达明显升高,E-cadherin蛋白表达降低。而小檗碱处理能够减少肾小管上皮细胞α-SMA的高表达,提高E-cadherin蛋白的表达;同时,小檗碱可有效降低由TGF-β1引起的NRK-52E细胞中ROS的过多产生。此外,小檗碱可有效抑制Smad2/3的活化。结论小檗碱可逆转TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用机制可能是通过抑制氧化应激及TGF-β/Smad信号通路而发挥作用。

关 键 词:TGF-β1  小檗碱  转分化  糖尿病肾病  肾小管上皮细胞
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