TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的 观察TGFβ1正、反义基因转染^60Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1、mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法 采用脂质体介导法进行基因稳定转染，转染细胞经PCR，DNA dot blot鉴定和RNA dot blot分析。结果 选择5Gy照射细胞，采用Lipofect AMINEuqf TGFβ1正、反义基因表达载体pMAM-TTGFβ1pMAMneo-AntiTGFβ1转入HELF，转染细胞经G418抗性筛选出来，在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA，转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性，且可用neo基因转导的PCR引物扩增出276bp的阳性片段。对提取的RNA地高辛标记的TGFβ1探针和α1（Ⅰ）寡核苷酸探针经RNA dot blot分析表明，转染pMAMneo-AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平下降，而转染pMAMneo-TGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA，前者表达水平比未转染细胞低，后者则略高。结论 TGFβ1反义基因转染^60Co γ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1 mRNA含量水平减少，使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低。

Gene transfection usinglipid-mediated TGF