脑血管痉挛中缝隙连接蛋白Cx43磷酸化位点分析及S368位点与其关系的研究

目的 观察脑血管痉挛中缝隙连接蛋白Cx43的磷酸化位点及其S368位点磷酸化水平的变化,探讨其与脑血管痉挛的关系. 方法 新西兰大白兔78只按随机数字表法分为4组:正常对照组(n=6)、单纯脑池注血组(n=24)、甘珀酸(CBX)脑池处理组(n=24)和溶媒脑池处理组(n=24),后3组应用枕大池二次注血法建立兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛模型及相应给药,并按1d、3d、7d、14d分成4亚组,每亚组6只.采用磷酸化蛋白富集试剂盒富集各组基底动脉中Cx43磷酸化总蛋白,再利用质谱技术鉴定出其磷酸化位点；应用Western blotting方法分析各组Cx43S368位点磷酸化水平的变化；通过数字减影血管造影技术(DSA)观察各组基底动脉直径变化情况. 结果 (1)质谱技术成功鉴定出Cx43的4个磷酸化位点,分别为Y265、S364、S365、S368.(2)Western blotting结果显示:正常对照组基底动脉Cx43 S368位点磷酸化水平较低(17.0％±2.3％)；单纯脑池注血组及溶媒脑池处理组与正常对照组相比,Cx43 S368位点磷酸化水平在1d、3d、7d、14d各时间点均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),且以7d表达最高,14d开始下降；CBX脑池处理组各时间点基底动脉Cx43 S368位点磷酸化水平显著低于单纯脑池注血组及溶媒脑池处理组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)DSA显示正常对照组第二次与首次造影基底动脉直径的百分比值平均为99.1％±1.3％,单纯脑池注血组、CBX脑池处理组、溶媒脑池处理组分别为66.1％±7.2％、91.3％±5.3％、63.7％±6.6％,CBX脑池处理组基底动脉直径显著狭窄于单纯脑池注血组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 缝隙连接蛋白Cx43 S368位点磷酸化可能与脑血管痉挛密切相关,且其可能是CBX缓解脑血管痉挛的机制之一.

Analysis of connexin Cx43 phosphorylation site and its relation with S368 site in rabbits after cerebral vasospasm