EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗的构建及其在鸡体内的分布

鸡球虫病给禽类养殖业带来重大经济影响。本实验利用DNA重组技术将柔嫩艾美尔球虫保护性抗原基因rhomboid和增强型绿色荧光蛋白EGFP基因串连，将其克隆到BCG中，构建EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗pMV361-Rho／EGFP。将rBCG口服免疫6日龄雏鸡，一周后剖杀，取肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官制作冰冻切片，激光共聚焦显微镜观察各组织器官rhomboid表达情况。另分别于免疫后7，14，21，28天提取肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官总RNA，实时定量RT-PCR方法检测rhomboid目的基因转录情况，比较各时期组织器官rhomboid基因表达量。结果显示，免疫一周后，用激光共聚焦显微镜观察到在肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官中均有EGFP表达。实时定量RT-PCR结果显示，免疫14天后rhomboid基因表达量达到高峰，随后开始下降，至28天后消失。本研究为重组卡介苗疫苗作为抗球虫疫苗的研究奠定基础。