QDs-SA和Cy3荧光标记阿尔茨海默病细胞模型β淀粉样蛋白的比较研究

目的：观察利用量子点（QDs）标记的链霉亲和素复合物（QDs—SA）和传统荧光染料Cy3分别标记的阿尔茨海默病（AD）转基因细胞模型β淀粉样蛋白（AD）在荧光强度和抗光漂白性能的差异。方法：将pcDNA3．1／APP质粒转染至HEK293细胞建立稳定表达株，Western blot法检测转染细胞APP蛋白的表达，细胞免疫荧光检测AD蛋白生成。建立AD转基因细胞模型，分别应用QDs—SA和Cy3细胞免疫荧光染色技术靶向标记转基因细胞模型的Aβ蛋白，激光共聚焦显微镜下对荧光强度和抗光漂白特性进行检测。结果：Western blot法在稳定转染pcDNA3．1／APP质粒的细胞中检测到APP目的蛋白谱带，而未转染的空载体转染组细胞未见APP蛋白表达。共聚焦荧光显微镜下观察到：①APP基因转染后能够生成大量Aβ蛋白；②QDs—SA特异标记的Aβ蛋白主要分布在细胞膜和胞质，显现出均匀分布的高密度橙红色强荧光；③Cy3特异标记AD蛋白荧光强度较QDs—SA标记弱，且细胞膜染色不均匀，部分细胞膜区域有染料少量团聚；④QDs—SA相较于传统Cy3荧光染料的平均荧光强度值更大（P〈0．05），488nm激发光连续激发12min，QDs—SA荧光标记的Aβ蛋白仍发射较强的橙红色荧光，荧光强度下降了29．25％，而传统荧光染料Cy3荧光强度下降幅度达76．82％。结论：QDs—SA能有效识别AD转基因细胞模型中AD蛋白，且在光稳定性和荧光强度等方面均优于传统的Cy3荧光染料标记的免疫荧光成像。