| 睾丸特异性新基因T490真核荧光表达载体的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 江智茂,唐爱发,郑锦芬,周永翠,桂耀庭,蔡志明.睾丸特异性新基因T490真核荧光表达载体的构建及其表达[J].中国男科学杂志,2009,23(1). |
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| 作者姓名： | 江智茂 唐爱发 郑锦芬 周永翠 桂耀庭 蔡志明 |
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| 作者单位： | 北京大学深圳医院男性生殖与遗传重点实验室,深圳,518036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家重点基础研究发展规划(973计划)，广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的睾丸特异性新基因T490超表达质粒pDT490-EGFP,检测其在Hela细胞中的表达情况.方法 采用RT-PCR的方法从成年Balb/c小鼠睾丸组织中扩增T490基冈,将该基凶连接克降到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,再将T490和EGFP融合基因酶切下来,克隆到pcDNA3.1(-)真核超表达载体上,以构建重组质粒pDT490EGFP.将该重组质粒通过阳性脂质体Lipofectamine 2000导入Hela细胞系中,在荧光显微镜F观察转染24h后融合基因的超表达情况,并用RT-PCR的方法进一步证实目的 基因mRNA的表达水平.结果 RT-PCR获取编码T490基因的全序列cDNA,大小为508bp;DNA测序和PCR方法证实T490和EGFP融合基因成功克隆到真核超表达载体L;在荧光显微镜下,转染24h后的Hela细胞具有很强的绿色荧光;RT.PCR显示转染后的Hela细胞T490基因mRNA的表达明显.结论 重组质粒pDT490-EGFP构建成功,并在细胞内明显表达,此质粒可应用于研究睾丸特异性新基因T490的功能,为T490的生物学研究奠定基础.
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| 关 键 词： | 基因表达 睾丸 精子发生 绿色荧光蛋白质类 |
Construction and expression of a recombinant eukaryotic vector containing testis-specific gene T490 and EGFP genes |
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| Jiang Zhimao,Tang Aifa,Zheng Jinfen,Zhou Yongcui,Gui Yaoting,Cai Zhiming.Construction and expression of a recombinant eukaryotic vector containing testis-specific gene T490 and EGFP genes[J].Chinese Journal of Andrology,2009,23(1). |
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| Authors: | Jiang Zhimao Tang Aifa Zheng Jinfen Zhou Yongcui Gui Yaoting Cai Zhiming |
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| Abstract: | Objective To construct a over-expression plasmid T490-EGFP,which contains a enhanced green fluorescent protein(EGFP) report gene and a testis-specific gene T490,and detect the expression of T490 in Hela cells. Methods Gene T490 was amplified by RT-PCR from a adult Balb/C mice testes,and then it's product was cloned to eukaryotic expression vector pEGFP-N1 to form a fusion gene T490-EGFP,then this fusion gene was inserted into pcDNA3.1(-) vector to form pcDNA3.1-T490-EGFP.The recombinant vector pcDNA3.1-T490... |
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| Keywords: | gene expression testis dpermatogenesis green fluroescent proteins |
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