| 醇醛脱氢酶的分离纯化及其基因文库的构建和筛选 |
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| 引用本文： | 谢莉,张铎,窦燕峰,张丽萍,赵宝华.醇醛脱氢酶的分离纯化及其基因文库的构建和筛选[J].微生物学报,2007,23(5). |
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| 作者姓名： | 谢莉 张铎 窦燕峰 张丽萍 赵宝华 |
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| 作者单位： | 河北师范大学生命科学院，石家庄 050016;河北师范大学生命科学院，石家庄 050016;石家庄制药集团，石家庄 050051;河北省生物研究所，石家庄 050081;河北师范大学生命科学院，石家庄 050016 |
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| 基金项目： | 河北省教育厅自然科学基金项目(No.2005131)。 |
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| 摘 要： | 在维生素C的发酵生产过程中，普通生酮基古龙酸菌S2（Ketogulonigenium vulgare)能产生醇醛脱氢酶，将L-山梨糖转化为VC的前体2-酮基-L-古龙酸（2-KLG）。通过超声波破碎菌体、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析，Q Sepharose High Performance柱层析等过程，从普通生酮基古龙酸菌S2发酵液中分离纯化了醇醛脱氢酶，并用该纯化酶免疫新西兰兔制备出了合格抗血清。同时，普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA经Sau3AⅠ部分酶切后，与黏粒载体pKC505连接，用包装蛋白进行包装，转染大肠杆菌DH5ɑ，构建了基因组文库。最后应用免疫酶斑点技术（Dot-ELISA）从12 000个克隆子中筛选得到一个阳性克隆K719#。通过检测该基因工程菌的活性，表明K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能，从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中获得了高效表达，这为简化VC的生产工艺奠定了基础。
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| 关 键 词： | 普通生酮基古龙酸菌 醇醛脱氢酶，分离纯化，免疫酶斑点技术，文库筛选 |
Purification of L-sorbose/L-sorbosne Dehydrogenase from Ketogulonigenium vulgare and Construction and Selection of Genomic Library |
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| XIE Li,ZHANG Duo,DOU Yan-Feng,ZHANG Li-Ping and ZHAO Bao-Hua.Purification of L-sorbose/L-sorbosne Dehydrogenase from Ketogulonigenium vulgare and Construction and Selection of Genomic Library[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(5). |
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| Authors: | XIE Li ZHANG Duo DOU Yan-Feng ZHANG Li-Ping and ZHAO Bao-Hua |
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| Affiliation: | College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China;College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China;Shijiazhuang Pharmaceutical Co. Ltd., Shijiazhuang 050051, China;Hebei Institute of Biology, Shijiazhuang 050081, China;College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ketogulonigenium vulgare L-sorbose/L-sorbosne dehydrogenase purification Dot-ELISA gene library and selection |
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