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酵母双杂交技术筛选与克隆白细胞中与NS5ATP7蛋白结合的蛋白编码基因
引用本文:张健,成军,王琳,邵清,陆荫英,梁耀东,李强,刘敏. 酵母双杂交技术筛选与克隆白细胞中与NS5ATP7蛋白结合的蛋白编码基因[J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2004, 13(1): 28-30
作者姓名:张健  成军  王琳  邵清  陆荫英  梁耀东  李强  刘敏
作者单位:100039,北京,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心
基金项目:国家自然科学基金攻关项目(C03011402,C30070689),军队"九、五"科技攻关项目(98D063),军队回国留学人员启动基金项目(98H038),军队"十、五"科技攻关青年基金项目(01Q138),军队"十、五"科技攻关项目(01MB135)
摘    要:目的 应用酵母双杂交体系寻找与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A反式激活蛋白7(human gene 5 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus,NS5ATP7)相互作用的白细胞蛋白,以探讨SN5ATP7的生物功能。方法 应用酵母双杂交系统3,构建NS5ATP7诱饵质粒,转化酵母AH109,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒。DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果 筛选出15个与NS5ATP7特异性相互作用的克隆,其中包括人类RhoGDF分裂抑制剂α、人类细胞色素b558a亚单位、人类MLL(MLL)基因外显子、人类S100钙结合蛋白A9(钙粒蛋白B)、人类移动抑制因子相关蛋白14变体E(S100A9)、人类金属硫蛋白2A、人类染色体序列及人类cDNA序列等,1个是未知功能基因。结论 初步克隆了NSSATP7与白细胞结合蛋白基因,根据所克隆到的基因,对以后研究NS5ATP7的功能有一定的提示作用;为以后研究这些能与NS5ATP7相互作用的基因在白细胞中的生理功能奠定了基础。

关 键 词:酵母双杂交技术 克隆 白细胞 NS5ATP7蛋白 蛋白编码基因 丙型肝炎病毒
修稿时间:2003-12-10

Screening and identification of proteins interacting with clonging of human gene 7 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus
ZHANG Jian,CHENG Jun,WANG Lin,et al Gene Therapy Research Center. Screening and identification of proteins interacting with clonging of human gene 7 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus[J]. Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology, 2004, 13(1): 28-30
Authors:ZHANG Jian  CHENG Jun  WANG Lin  et al Gene Therapy Research Center
Affiliation:ZHANG Jian,CHENG Jun,WANG Lin,et al Gene Therapy Research Center,Institute of Infectious Diseases,The 302 Hospital of PLA,Beijing 100039,China
Abstract:
Keywords:Human gene 5 transactivated by nonstructural protein 5A  Hepatitis C virus  Yeast-two hybrid
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