副溶血弧菌的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法建立

基于副溶血弧菌gyrB基因保守序列设计1对特异性引物，建立SYBR GreenⅠ实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测副溶血弧菌的方法。SYBR GreenⅠ实时定量PCR的Tm为90℃，扩增产物的熔解曲线只出现1个单特异峰，无引物二聚体，表明该引物具有较好的特异性；所制作的实时定量PCR扩增标准曲线在2.06×108～2.06×103拷贝数之间有较好的线性关系，相关系数为0.992，能对副溶血弧进行准确的定量分析。该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需4～5h，且较传统方法敏感、操作简单，可用于针对副溶血弧菌的进出口检验检疫、食品安全检测及该菌引起的水产动物疾病的诊断与分子流行病学调查。