基于PKCθ/STAT3信号通路探讨虎杖苷抑制溃疡性结肠炎小鼠Th17细胞的效应

目的 探讨虎杖苷对小鼠溃疡性结肠炎（UC）的治疗作用，并通过其调控蛋白激酶Cθ（PKCθ）/信号转导与转录激活因子3（STAT3）通路信号对辅助性T细胞17（Th17）细胞效应的抑制作用探讨其治疗UC的作用机制。方法 32只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、虎杖苷组（0.045 g·kg^-1）及柳氮磺吡啶组（0.5 g·kg^-1）。采用3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液给与小鼠自由饮水构建UC模型，虎杖苷和柳氮磺吡啶组于造模前0.5 h灌胃给药，连续7 d，正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃。末次给药后取结肠组织，苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理变化，流式细胞术检测结肠黏膜固有层中Th17比例，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中白细胞介素-17A（IL-17A）的表达。磁珠分选提取C57BL/6小鼠脾脏CD4⁺T细胞进行体外培养，加入细胞刺激合剂刺激并随机分为正常组、模型组、虎杖苷低、高剂量组。流式细胞术检测虎杖苷对Th17效应的影响及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化PKCθ和STAT3的蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠体质量明显下降、疾病活动指数（DAI）评分显著升高（P<0.01），结肠黏膜上皮破损并可见黏膜及黏膜下层炎细胞浸润明显，结肠黏膜固有层中Th17的比例显著升高（P<0.01），血清IL-17A的含量显著增加（P<0.01）；与模型组比较，虎杖苷和柳氮磺吡啶组体质量及DAI评分均有显著的改善（P<0.01），结肠组织损伤程度明显改善，结肠黏膜固有层中Th17的比例显著下降（P<0.01），血清中IL-17A的含量显著下降（P<0.01）。体外实验显示，与正常组比较，模型组Th17细胞比例显著增加（P<0.01），PKCθ和STAT3的磷酸化水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，虎杖苷组Th17细胞比例显著下降（P<0.01），PKCθ和STAT3的磷酸化水平显著降低（P<0.01）。结论 虎杖苷能够抑制PKCθ以及STAT3的磷酸化表达，进而抑制Th17细胞分泌IL-17A，改善肠黏膜炎性病理，对UC起治疗作用。