c-myc反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的：观察c-myc反义寡核苷酸上调人高转移性肺巨细胞腺癌PG细胞表面抗原分子的表达水平，提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法：PT－PCR方法检测c-myc mRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞增殖活性和CD3AK杀伤活性的变化。流式细胞术检测细胞表面抗原表达的变化以及c-myc蛋白表达水平的变化。结果：c-myc反义寡核苷酸（1μmol/L）明显地抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达水平，显著提高细胞表面HLA－ABC、ICAM－1分子的表达，其表达率分别从68．44％、38．40％增高到83．16％和42．09％（P＜0．01）。CD3AK对反义寡核苷酸处理的PG细胞的不同效靶比杀伤活性，分别从40．0％、65．0％、74．0％增高到52．0％、74．0％、91．0％（P＜0．01）。结论：c-myc反义寡核苷酸通过抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达，上调PG细胞表面HLA－ABC、ICAM－1分子的表达水平，提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。     

青蒿反义鲨烯合酶基因植物表达载体PBI121-SS的构建

目的：利用基因工程对野生青蒿进行人工操纵来提高其青蒿素生产能力。方法：从已有载体PBI121-SS通过PCR获得鲨烯合酶基因（sS）,然后连接pMD—18载体,测序后,酶切,连接表达载体PBI121-SS,通过菌液PCR,抽取质粒,酶切检测。结果：通过上述方法植物表达载体PBI121-SS构建成功,并转化农杆菌LBA4404。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药诱导细胞凋亡的研究

目的：探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ）的方法，提高化疗效果。方法：采用多药耐药反义基因（ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ，而诱导肿瘤细胞凋亡。结果：ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞产生大量ＤＮＡ断片，流式细胞仪检测发现几乎全部ｍｄｒ－１＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。结论：ｍｄｒ－１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ｍｄｒ－１基因表达，逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ，促进阿霉素诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡，为其临床应用提供理论依据。     

胰腺癌的癌基因治疗

胰腺癌癌基因治疗尚处于实验阶段 ,主要包括自杀基因、反义基因、免疫基因及抑癌基因替代治疗。1　自杀基因治疗将自杀基因 (Suicide gene)导入人肿瘤细胞 ,使其产生酶并将无毒性的药物前体代谢成毒性产物而杀伤肿瘤细胞 ,这种疗法称为肿瘤的自杀基因治疗。大肠杆菌的胞嘧啶脱氨酶能将 5 -氟胞嘧啶 (5 - FC)代谢成 5 -氟脲嘧啶 (5 - fleorouracil,5 -FU) ,5 - FU抑制 RNA和 DNA的合成而导致细胞死亡。有人证实尚未转导的细胞与转导细胞混合培养或接种于裸鼠时 ,也被 5 - FC通过旁观者效应 (bystander effect)的机制杀伤 ,使该方法在肿…     

反义基因对肝癌血管内皮生长因子表达的抑制

原发性肝细胞癌(HCC)的生长很大程度上依赖新生血管的形成。抑制肿瘤血管的形成，特别是肿瘤血管形成调控因子血管内皮生长因子(VEGF)的基因治疗是近年HCC治疗研究的新方向。本文通过实验方法探讨不同序列的反义寡核苷酸(ODN)对VEGF表达的抑制效应，为今后肝癌VEGF的基因治疗提供实验基础。     

正反义人PIN1基因克隆及真核表达载体的构建

目的 克隆正、反义人PIN1基因（hPIN1）及构建hPIN1基因正、反义真核表达载体.方法 应用RT-PCR技术从人骨肉瘤细胞系MG-63细胞总RNA中成功扩增出990bp包含hPIN1基因编码区的cDNA序列,按正、反方向加上BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点后形成正、反义hPIN1基因,然后连入含BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点的pIRES2-EGFP表达质粒上,构建正、反义hPIN1基因的重组真核表达质粒phPIN1.结果 扩增的cDNA经测秩序与基因文库完全一致;BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,正、反义表达质粒形成5.3 ＋0.99kb 两条带,与理论计算值完全一致.结论 成功克隆正、反义人PIN1基因及构建hPIN1基因的正、反义真核表达载体.     

反义血管内皮生长因子对乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的　构建表达反义血管内皮生长因子165(VEGF165)的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法　应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果　成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞增殖能力降低。结论　VEGF165反义RNA能够明显减少人乳腺癌细胞株MCF- 7内VEGF165的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,证明了反义基因干预治疗的有效性,为乳腺癌的基因治疗进行了有益探索。     

反义mTOR基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组转染纳米粒子包载的反义mTOR基因,空载体组转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3、7、14、28d取材,常规HE、弹力纤维VG染色,RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR蛋白产物表达较其他组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。