紫草多糖对培养大鼠颗粒细胞生成甾体激素的影响

目的研究中药紫草的水溶成分——紫草多糖对体外培养颗粒细胞的直接作用。方法分离出大鼠双侧卵巢的颗粒细胞进行体外培养。选取健康未成年雌性SD大鼠160只,其中60只按随机数字表法分为基础组和hCG组,分别采用不同浓度（0.00、0.30、0.75、1.50、3.00、7.50 g·L^-1）紫草多糖培养,每组5只;另100只按随机数字表法分为空白对照组、紫草多糖组、hCG组和hCG-紫草多糖组,分别进行不同时间（0、1、2、3、4 h）的培养,每组5只,共计100只。采用放射免疫测定法（RIA）测定不同实验组颗粒细胞培养液中孕酮（Progesterone,P4）和雌二醇（Estradiol,E2）的浓度。结果紫草多糖呈剂量依赖性地抑制hCG刺激下颗粒细胞P4和E2的生成,大剂量（大于3.00 g·L^-1）也抑制基础P4和E2的生成,紫草多糖主要使培养液中的P4含量降低,但大剂量也可使细胞内的P4含量降低。紫草多糖作用于颗粒细胞1 h后明显抑制hCG促P4生成的作用,但细胞洗涤后再培养,对hCG的反应性与对照组比较无明显变化。结论紫草多糖可直接作用于体外培养的颗粒细胞,抑制hCG促甾体激素生成的作用,该抑制作用起效时间短,并且是可逆的。     

海兰褐鸡卵泡颗粒细胞微管去稳蛋白2过表达对Ras-MAPK信号通路的影响

目的探讨微管去稳蛋白2(stathmin-2-like protein,STMN2)过表达对海兰褐鸡卵泡颗粒细胞中Ras-MAPK(mitogen-activated protein kinase)信号通路的影响。方法将STMN2腺病毒过表达载体以MOI为350 pfu/cell转染原代培养的蛋鸡卵泡颗粒细胞模型,设培养液组和腺病毒空载体组为对照组,转染48 h后,收集细胞总RNA和总蛋白,荧光定量PCR法检测各组细胞STMN2 mRNA水平及STMN2过表达对颗粒细胞分泌的细胞外调节蛋白激酶1(extracellular regulated protein kinases1,erk1)、erk2、大鼠肉瘤蛋白(rat sarcoma,ras)和转录激活因子ETS样蛋白1(ets-like protein 1,elk-1)的影响,Western blot法检测各组STMN2蛋白水平及STMN2过表达对颗粒细胞分泌的erk1、erk2、磷酸化erk1(p-erk1)、p-erk2、ras和elk-1的影响。结果与培养液组和腺病毒空载体组比较,STMN2过表达载体组STMN2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P0.01);除elk-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)和elk-1 mRNA水平显著增加(P0.05)外,STMN2过表达使颗粒细胞分泌的目的基因mRNA与蛋白表达水平均极显著增加(P0.01)。结论 STMN2可通过Ras-MAPK信号通路影响蛋鸡卵泡颗粒细胞周期。     

成年海马神经再生改善模式分离鲁棒性

成年海马神经再生(adult hippocampal neurogenesis, AHN)被认为能有效参与齿状回(dentate gyrus, DG)网络来加强模式分离功能.目前虽然神经再生在模式分离中的潜在作用已在理论上得到了研究,但产生的新生颗粒细胞在信息处理和网络调节中的具体作用仍存在争议.针对上述问题,本文引入4-6周新生颗粒细胞作为独立的信息处理单元,提出了一种具有神经再生的DG网络计算模型.重点研究了不同输入刺激下新生颗粒细胞对模式分离的贡献.通过模拟实验,本文发现在不同强度的刺激下,新生颗粒细胞在齿状回网络中扮演着不同的角色.在低强度刺激下,新生颗粒细胞利用其易激活的神经元特性,可以恢复网络的信息表达能力,避免模式分离失败.在高强度刺激下,新生颗粒细胞作为一种中间神经元,能有效增强局部回路的反馈抑制作用,提高成熟颗粒细胞的稀疏性,最终增强模式分离功能.因此,该模型预测了在更精细和更广泛的输入下,成年海马神经再生在模式分离鲁棒性中的关键作用.     

嗅球中神经元间的相互作用及同步运动分析

嗅球对嗅觉信息的处理是嗅觉系统信号编码的一个重要环节,其中兴奋性的僧帽细胞（Mitral Cell, MC）与抑制性的颗粒细胞（Granular Cell, GC）的相互作用尤为关键。本文首先介绍了嗅觉系统网络中关于同步振荡的研究现状,然后建立嗅球中僧帽细胞及颗粒细胞的动力学模型,仿真得到了单个僧帽细胞、颗粒细胞以及僧帽细胞与颗粒细胞在耦合条件下神经元的发放模式。结果表明,僧帽细胞对颗粒细胞有兴奋性作用,而颗粒细胞对僧帽细胞有抑制性作用,细胞放电序列随着突触连接强度的改变而改变。此外,建立简单的嗅觉网络模型,分析了当颗粒细胞分别构成环形和网格状两种拓扑结构时,不同网络对两个僧帽细胞同步性的影响,用同步性指标ISI-distance刻画同步程度。数值分析表明颗粒细胞网格状的拓扑结构对僧帽细胞的同步性作用更为明显一些。     

顺铂软膏对小鼠皮肤颗粒细胞生成的影响

目的 观察顺铂软膏对小鼠皮肤颗粒细胞生成和体重的影响。方法 昆明种小鼠25 只,随机均分为5组:空白对照组、迪维霜组、0.1 %顺铂软膏组、0.5 %顺铂软膏组、1%顺铂软膏组。外用给药18d后,观察动物体重变化和皮肤病理学变化。结果 与空白对照组比较,0.1%~ 1 %顺铂软膏均明显增加皮肤颗粒细胞生成(P<0.01),对体重增加的影响均明显小于迪维霜(P>0.01),也未见明显的局部刺激。结论 顺铂软膏可促进皮肤颗粒细胞生成。     

短时受精提前脱颗粒细胞对胚胎质量及临床结局的影响

目的:探讨短时受精提前脱颗粒细胞对体外受精胚胎质量及临床结局的影响。方法:回顾性分析2015年1月-12月就诊于本中心的1693例患者资料,将这些患者分为短时受精提前脱颗粒细胞后发现第二极体卵子行过夜受精组107例及传统过夜受精组1147例,观察早期脱颗粒细胞对正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率的影响。再将短时受精提前脱颗粒细胞后未发现第二极体卵子行ICSI组13例与传统的ICSI组426例,比较两组的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率。结果:短时受精提前脱颗粒细胞发现第二极体卵子行过夜受精组与传统过夜受精组之间的正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率比较差异均无统计学意义(P<0.05)。并且短时受精提前脱颗粒细胞后未发现第二极体卵子行ICSI组的正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率与传统ICSI组相比,差异均无统计学意义(P<0.05)。结论:短时受精提前脱颗粒细胞与常规过夜IVF组相比并没有提高多PN的受精率,而与传统ICSI组相比多PN受精率没有差异,也没有降低胚胎的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率。短时受精提前脱颗粒细胞可获得与常规IVF和ICSI相似的临床结局,短时受精通过提前观察第二极体的排出来判断是否受精,可预防出现传统过夜IVF低受精和完全不受精,降低ICSI的使用率。     

靶向作用TIMP-2调控人卵巢颗粒细胞的增殖能力

目的:探讨miR-106a对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖能力的调节作用,并初步探讨其可能的作用靶点。方法:采用细胞转染法调控miR-106a在颗粒细胞中的表达,RT-PCR法检测其表达水平。采用MTT法检测细胞的增殖活性,生物信息学预测miR-106a可能的靶基因并采用双荧光素酶实验验证,Western blot法检测靶蛋白的表达。结果:miR-106a在KGN细胞中表达显著高于正常卵巢上皮细胞(IOSE80),差异有统计学意义(P<0.05),抑制miR-106a表达后KGN细胞的增殖活性显著降低(P<0.05),双荧光素酶实验结果证实miR-106a可直接靶向作用于TIMP-2基因,Western blot结果显示过表达miR-106a后TIMP-2蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:miR-106a可促进KGN细胞的增殖,与靶向降低TIMP-2表达水平有关。     

人卵巢颗粒细胞的体外分离培养方法改进

目的建立高效稳定的人卵巢颗粒细胞的体外分离培养方法。方法收集体外受精-胚胎移植取卵时的卵泡液,查阅近几年文献中人卵巢颗粒细胞的分离纯化方法,对沉淀法和梯度密度离心法进行改进,用改进了的沉淀法和密度梯度离心法相结合对卵巢颗粒细胞进行分离纯化,选择合适的消化时间,简化分离纯化步骤从而减少对颗粒细胞的损伤。结果分离出的人卵巢颗粒细胞生长状态良好,存活率高,收获的细胞数量多,后续生长稳定。结论建立了人卵巢颗粒细胞体外培养的稳定模型,为颗粒细胞的体外研究奠定良好的基础。     

重组人卵泡刺激素作用下卵泡黄素化颗粒细胞M-CSF及受体表达的临床差异

目的:比较使用重组人卵泡刺激素（r-FSH）后,患者卵泡黄素化颗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及其受体（M-CSFR）mRNA表达的差异,以探讨M-CSF及其受体对卵巢反应性的影响。方法: 接受体外受精治疗的96例多囊卵巢综合征（PCOS）患者和157例非PCOS患者,根据其使用r-FSH后反应性不同分为四组：即PCOS快、慢反应组和非PCOS快、慢反应组。收集成熟卵泡穿刺后黄素化颗粒细胞,采用SYBR Green荧光定量RT-PCR法检测颗粒细胞M-CSF、M-CSFR和管家基因GAPDH的mRNA表达,通过比较阈值法（CT值目的基因－CT值管家基因）进行基因相对定量。双独立样本t检验比较组间基因表达差异,并对差异有统计学意义的指标行Spearman相关分析检验。结果:各组患者r-FSH使用量无统计学差异（P>0.05）。PCOS患者整体与非PCOS患者整体比较,M-CSF和M-CSFR的mRNA定量均无统计学差异（P>0.05）。分组比较后,各组间M-CSF mRNA定量无统计学差异（P>0.05）。而PCOS慢反应组M-CSFR mRNA定量低于快反应组患者,差异有统计学意义（P=0.006）。对PCOS组颗粒细胞M-CSFR mRNA定量和r-FSH使用天数的Spearman相关分析提示,两者相关性有统计学意义（P=0.023）,相关系数0.511。 结论:PCOS卵巢慢反应患者对促排卵药物反应迟缓可能与其颗粒细胞M-CSFR表达减少有关。M-CSF及其受体参与影响卵巢对r-FSH的反应性。     

多囊卵巢综合征患者卵泡基底膜超微结构的研究

运用透射电镜观察多囊卵巢综合征(PCOS)组及正常妇女组卵泡的形态,用体视学方法测量两组各级卵泡基底膜的厚度。结果显示:两组原始卵泡的基底膜厚度相似,但随着卵泡的发育卵泡基底膜逐渐增厚,PCOS组增厚更明显,对照组初级卵泡基底膜的平均厚度是0 293±0 204μm,PCOS组是0 463±0 287μm,两组比较有统计学差异(P<0 05)。对照组次级卵泡基底膜的平均厚度为0 542±0 298μm,PCOS组为1 234±0 345μm,两组比较有统计学差异(P<0 05)。两组原始卵泡的前颗粒细胞的超微结构相似,随着卵泡的发育,PCOS组的颗粒细胞内参与蛋白质合成的细胞器明显较对照组丰富;正常组窦前卵泡的颗粒细胞出现分化现象,PCOS组却未见分化现象。结果提示:PCOS患者卵泡基底膜屏障的增厚可能使卵泡刺激素FSH进入卵泡困难,颗粒细胞不能正常分化,"FSH 颗粒细胞轴"功能低下,导致不孕症。