"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性

目的　探讨“彗星”分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性。方法　应用“彗星”分析法 ,以尾力距之比 (RTM)作为终指标 ,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等 3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性。裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为 4× 10 4ml的单细胞悬液后 ,分成对照组 (0Gy)和不同剂量照射组 ,照射组分别给予 2、5、10和 15Gy的 6MVX射线的冰上照射 ,照射后立即进行“彗星”分析。结果　 3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时 (0Gy)的尾力矩 (TM)差异有显著性意义 (F =9.11,P <0 .0 1)。不同剂量 (2、5、10和 15Gy)照射后 ,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :肺腺癌 >食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 ,显然与临床一般印象不符 ;而经与对照组进行“本底”校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 >肺腺癌 ,则符合临床一般印象。结论　①应用“彗星”分析法检测实体肿瘤的放射敏感性 ,尾力矩必须进行“本底”校正 ,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异。②“彗星”分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性。     

Absence of ATM truncations in patients with severe acute radiation reactions

Purpose: Severe acute toxicity limits the effective use of radiotherapy in patients who are radiosensitive, and it is not usually possible to identify these radiohypersensitive (R-H) individuals before treatment commences. Five such R-H patients were detected over a 3-year period. We undertook this study to determine whether the severe acute radiohypersensitivity of these five individuals showed any correlation with cellular and molecular parameters known to be abnormal in radiosensitivity-related syndromes such as ataxia–telangiectasia (A-T).

Methods and Materials: Lymphoblastoid cells were isolated from fresh blood from the 5 R-H individuals who had previously demonstrated clinical R-H at least 9 months prior to sampling. Lymphoblastoid cell lines (LCLs) were established to determine the extent of postradiation chromosomal aberrations, cell cycle delay, cell proliferation, and tumor suppressor p53 protein stabilization. The polymerase chain reaction (PCR) and protein truncation (PTT) assays were used to test for the possibility of mutations in the gene mutated in A-T, termed ATM.

Results: LCLs derived from R-H subjects retained a significantly higher degree of radiation-induced chromosomal aberrations when compared to normal control LCLs. p53 stabilization by ionizing radiation appeared normal in all but one R-H subject. There was no evidence of A-T gene truncation mutations in any of the R-H subjects tested.

Conclusions: All R-H subjects in this study had their cellular radiosensitivity confirmed by the chromosomal aberration assay. Delayed p53 stabilization at 4 hours postirradiation in one R-H subject suggested that different etiologies may apply in the radiohypersensitivity investigated in this study.     

蚯蚓纤溶酶增加胃癌细胞对放射线敏感性的实验研究

目的探讨蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞株MGC803的放射增敏作用及机制。方法采用克隆形成实验观察蚯蚓纤溶酶的放射增敏作用;流式细胞术观察药物对胃癌细胞株MGC803周期分布的影响;RT-PCR法检测药物对细胞内硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGPx)基因表达的影响。结果蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞有放射增敏效应,100uku/L、300uku/L蚯蚓纤溶酶的放射增敏比分别为1.06和1.14。射线照射后MGC803细胞发生G1期阻滞,蚯蚓纤溶酶对细胞G1期阻滞无明显影响;PCR检测发现射线可诱导的SeGPxmRNA表达下调,蚯蚓纤溶酶能够增强射线诱导的SeGPxmRNA表达下调作用。结论蚯蚓纤溶酶能够增加胃癌细胞对放射线的敏感性,增敏机理可能与药物下调细胞内抗氧化酶SeGPx基因表达有关。     

敲低Bmi-1对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性的影响

目的探讨敲低Bmi-1的表达水平对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性的影响。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测4种鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、HNE1和HONE1中Bmi-1的表达,筛选出高表达Bmi-1的细胞株。设计3条针对Bmi-1 mRNA的干扰序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3),用于构建慢病毒重组载体Bmi-1-shRNA1、Bmi-1-shRNA2、Bmi-1-shRNA3,然后转染至高表达Bmi-1的细胞株中,筛选出敲低Bmi-1效果最佳的慢病毒重组载体。将筛选出的慢病毒重组载体转染至高表达Bmi-1的鼻咽癌细胞株中,使用2 Gy放射线(IR)进行照射,通过平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况。结果在4种鼻咽癌细胞株中,CNE2细胞的Bmi-1 mRNA表达水平最高(P<0.05),CNE1、CNE2细胞中Bmi-1蛋白表达相对较高(P<0.05)。构建的3条慢病毒重组载体Bmi-1-shRNA1、Bmi-1-shRNA2、Bmi-1-shRNA3均可降低CNE2细胞中...     

脑胶质瘤细胞SHG44与U87-MG辐射敏感性差异及其机制初步研究

目的本实验通过研究脑胶质瘤细胞SHG44与U87-MG的辐射敏感性及COX-2 mRNA表达水平差异,初步探讨胶质瘤细胞辐射敏感性差异的可能机制,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据。方法细胞克隆法检测不同60Co-γ射线照射剂量下细胞克隆存活率;RT-PCR法检测两种细胞COX-2 mRNA表达水平。结果实验表明两种胶质瘤细胞的辐射敏感性存在差异,U87-MG的辐射敏感性高于SHG44细胞,其差异具有统计学意义(P<0.05);两种细胞的COX-2 mRNA表达水平不同,U87-MG细胞COX-2 mRNA表达水平高于SHG44细胞,其差异具有统计学意义(P<0.01)。结论本实验研究认为脑胶质瘤U87-MG的辐射敏感感性高于SHG44细胞,其机制与其COX-2 mRNA表达水平密切相关。     

CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 探讨CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响.方法 采用流式细胞术检测鼻咽癌CNE-2细胞膜CD166阳性表达率,免疫磁珠分选技术获得CNE-2-CD166(+)、CNE-2-CD166(-)细胞亚群,克隆形成实验验证其放射敏感性,CCK-8法及流式细胞术检测10 Gy剂量照射前后的细胞增殖率及细胞凋亡率.结果 CNE-2细胞膜CD166阳性表达率为(24.27±5.31)％,分选后CNE-2-CD166(+)细胞CD166阳性表达率为96.5％,CNE-2-CD166(-)细胞为0.6％.克隆形成实验结果显示,CNE-2-CD166(-)细胞相对CNE-2-CD166(+)细胞的放射增敏比(sensitization enhancement ratio,SER)为1.24.10Gy照射后24 h、48 h和72 h,CNE-2-CD166(+)细胞的存活分数分别为(76.66±3.36)％、(62.44± 1.66)％和(55.21±3.39)％,CNE-2-CD166(-)细胞为(60.34±5.13)％、(41.11±3.00)％和(35.28±4.36)％,同时段内两组细胞的存活分数比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).10 Gy照射前,CNE-2-CD 166(+)细胞和CNE-2-CD166(-)细胞凋亡率分别为(5.87±1.14)％和(6.67±1.68)％,差异无统计学意义(P＞0.05);10 Gy照射后48 h,CNE-2-CD166(+)细胞凋亡率为(19.37±2.54)％,显著低于CNE-2-CD166(-)细胞的(28.90±4.04)％,差异有统计学意义(P=0.026).结论 CD166表达阳性的鼻咽癌CNE-2细胞对放射更具抗拒性,可能与减少细胞受照射后的凋亡率降低有关.     

LncRNA MEG3靶向miR-181a-5p调控宫颈癌细胞放射敏感性

目的 研究LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测放射抗性和放射敏感性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达;将过表达对照组(转染pcDNA 3.1)、过表达LncRNA MEG3组(转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-NC组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-NC)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-181a-5p组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-181a-5p),均用脂质体法转染至SiHa细胞;克隆形成实验检测细胞的存活分数;流式细胞术检测细胞的凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;Western blot检测细胞中PTEN、p-Akt、Akt的蛋白表达。结果 与放射敏感组相比,放射抗性宫颈癌组织中LncRNA MEG3的表达明显降低(P<0.05),其表达量与宫颈癌细胞的放射敏感性呈正相关;过表达LncRNA MEG3、抑制miR-181a-5p均可显著增强宫颈癌细胞SiHa放射敏感性,促进凋亡(P<0.05);野生型LncRNA MEG3细胞的荧光活性受miR-181a-5p的抑制。过表达miR-181a-5p逆转了LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射增敏和促凋亡作用及对PTEN/Akt信号通路的调控。结论 长链非编码RNA LncRNA MEG3可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-181a-5p调控PTEN/Akt 信号通路有关,可为提高宫颈癌的预后提供新方向。     

阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 以不同浓度阿帕替尼（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L）以及不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、10 Gy、20 Gy）分别处理HGC-27细胞,再选取2 Gy和6 Gy单独照射或联合10 μmol/L阿帕替尼处理HGC-27细胞;采用ELISA法检测细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,免疫荧光染色技术检测γ-H2AX的表达情况。结果 阿帕替尼呈浓度及时间依赖性抑制胃癌HGC-27细胞增殖（均P<0.05）;不同剂量照射可促进细胞VEGF表达释放,且呈时间及剂量依赖性（均P<0.01）。10 μmol/L阿帕替尼分别联合2 Gy和6 Gy照射后,HGC-27细胞增殖抑制作用、细胞凋亡率及G2/M期的细胞比例均较单照组升高（均P<0.01）,且6 Gy联合组的作用强度大于2 Gy联合组（均P<0.01）。6 Gy联合组细胞核内γ-H2AX焦点淬灭较6 Gy单照组延迟。结论 阿帕替尼通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡并诱导细胞周期再分布增强胃癌HGC-27细胞放射敏感性,其作用机制可能与延迟γ-H2AX表达而干扰DNA双链断裂修复有关。     

DDX46基因对结肠癌细胞电离辐射敏感性的影响及机制研究

目的 探讨DDX46基因对结肠癌细胞的电离辐射敏感性的影响及其作用机制。方法 DDX46基因RNA干扰慢病毒转染的SW480细胞为实验组,空载质粒慢病毒转染的SW480细胞为对照组。两组细胞转染72 h后,分别进行0和4 Gy X射线照射,采用CCK-8方法检测两组的细胞活力;实验组联合4 Gy X射线照射24 h后,采用免疫荧光技术和Western blot法检测细胞γ-H2AX foci数量以及DNA损伤修复通路关键蛋白的表达水平,确定DDX46与辐射诱导的DNA损伤修复的关系。结果 4 Gy X射线照射24 h后,实验组的细胞活力比照射前降低（15.02±3.92）%（t=-4.696,P<0.05）,比对照组降低（17.43±1.83）%（t=4.844,P<0.01）;而对照组照射前后比较差异无统计学意义（P>0.05）。同时,实验组γ-H2AX foci数量相比于对照组增加了（43.03±17.6）%（t=-3.108,P<0.05）,ATM的蛋白水平显著升高（t=7.530,P<0.01）,而ATM的活性形式p-ATM以及ATM的下游靶蛋白Rad50的蛋白水平则明显降低（t=4.260、4.260、P<0.05）,同时γ-H2AX的蛋白表达水平也有一定程度的升高（t=-3.090,P<0.05）,DNA-PK在两组细胞内的蛋白水平变化不大。结论 沉默DDX46可以提高结肠癌细胞系SW480的辐射敏感性,其机制可能是DDX46表达沉默抑制结肠癌细胞系SW480中ATM的活化,从而抑制辐射诱导的DNA损伤的修复,提高SW480的辐射敏感性。     

原发性肝细胞癌放疗抗拒分子机制研究进展

原发性肝细胞癌放疗疗效差异与肿瘤的放疗抗拒密切相关。多种基因及分子通路参与调控原发性肝细胞癌对放疗的抗拒,对原发性肝细胞癌放疗抗拒分子标志物的研究可预测放疗敏感性,对放疗抗拒的逆转研究有重要意义。