产油丝状真菌高山被孢霉中蝶呤类化合物的提取及检测

建立了高效液相色谱-荧光检测法同时测定高山被孢霉体内新蝶呤、蝶呤和生物蝶呤的方法。高山被孢霉在液氮破壁、酸性条件下经碘-碘化钾溶液氧化1h、滴加抗坏血酸还原液后,体内的四氢生物蝶呤及其前体二氢蝶呤三磷酸盐和6-丙酮酰四氢生物蝶呤分别被氧化成相应的氧化产物新蝶呤、蝶呤、生物蝶呤。经离子交换树脂纯化后,利用高效液相色谱进一步分离得到了氧化产物蝶呤、新蝶呤和生物蝶呤,并采用电喷雾质谱对定性结果进行确认。色谱柱为Inertsil ODS-3C₁₈（5μm,150mm×4.6mm）,用10mmol/L的磷酸氢二钠（pH6.0）作为流动相,流速为1.2mL/min,荧光检测器激发波长为350nm,吸收波长为450nm。检测出的新蝶呤、生物蝶呤和蝶呤的检出限依次是:0.003、0.002、0.005μg/mL。本方法能快速并准确的检测各类蝶呤类化合物,为利用高山被孢霉发酵生产四氢生物蝶呤奠定一定基础。      

发酵法生产新型营养强化剂--花生四烯酸

本文研究了温度、PH、培养时间以及碳源、氮源等因素对高山被孢霉菌I49-N18的细胞生长、产油脂和花生四烯酸的影响,确定了该菌株发酵生产花生四烯酸的最佳培养基和最佳培养条件,使得其干菌体重（DW）可达25.9g/l,总脂（TL/DW）含量达36.6％,花生四烯酸（AA/TL）含量达71.0％。     

利用乙醇胁迫作用提高花生四烯酸产量

利用乙醇胁迫作用提高花生四烯酸(AA)产量。探讨了乙醇加入时间及加入量,并通过发酵后期降低转速延长了乙醇胁迫作用时间,确定了降低转速的时间点。结果表明,发酵5d后添加4%的乙醇,并在5.5d后降低转速减少机械力所带来的对发酵后期菌丝体的破坏作用,最终将AA产量从10.6g/L提高到17.6g/L。     

高山被孢霉生长和产脂的影响因素分析

为探究影响高山被孢霉生长和产脂的因素,分析不同初始葡萄糖质量浓度、活化次数、接种量、装液量、发酵时间、菌球打碎时间等条件下高山被孢霉生长和产脂特点。结果表明,初始葡萄糖质量浓度、装液量和发酵时间对菌株生长和产脂的影响最为显著,且初始葡萄糖质量浓度与花生四烯酸的产量呈负相关性。根据不同条件下菌株生长和产脂情况,得到高山被孢霉最佳培养条件为:菌株活化3次,用高速分散机8 000 r/min打碎20 s至均匀状态,按2%～3%(体积分数)接种量接入初始葡萄糖质量浓度为50 g/L、装液量为20%(体积分数)的发酵培养基中,200 r/min、28℃培养8. 5 d。     

深黄被孢霉H3,3410-5γ-亚麻酸发酵的实验研究

γ-亚麻酸是人体必需脂肪酸。深黄被孢霉被认为是潜力较大的γ-亚麻酸的发酵生产菌。对深黄被孢霉突变株H3,3410-5产γ-亚麻酸发酵培养基和发酵实验优化,结果表明,菌丝体平均得率为25.9 g/L,总油脂平均含量为44.0%,油脂中γ-亚麻酸比率为10.97%。三项指标分别比优化前提高了约6.6%、5.8%和16.3%。     

菌丝体老化对被孢霉菌产花生四烯酸的影响

报道了花生四烯酸生产菌被孢霉菌菌丝体老化对产花生四烯酸的影响。研究结果表明：不同培养时间的菌丝（３ｄ—７ｄ）在室温下老化１５ｄ，菌丝体中总脂含量由１８％—３０％上升至３６％—４１％；菌丝体中ＡＡ含量由１．１％—２．６％上升至２．６％—３．７％。但菌丝体油脂中ＡＡ含量在老化过程中没有显著变化。不同老化温度（５℃—２５℃）对菌丝体中ＡＡ含量没有显著影响。     

Increase in the γ-linolenic acid content by solvent winterization of fungal oil extracted fromMortierella genus

The fungal oil extracted fromMortierella ramanniana var.angulispora (IFO 8187) was solvent winterized in order to raise the content of γ-linolenic acid (GLA). Effects of winterization conditions (solvent, oil concentration in the solvent and temperature) and changes of glyceride compositions were discussed. The fungal oil was separated into four diglycerides and 17 triglycerides (TG) with high performance liquid chromatography. The predominant species were POO, POP and LOP, whose contents were 24.4, 22.9 and 9.4% of the total TG, respectively. Ethanol at 4°C gave the highest GLA content of 10.5% in spite of lower yield than with acetone at −20°C. The highest separation efficiency for GLA (η_GLA) was 0.27 with acetone at −20°C and 10% oil concentration, resulting in 8.3% of GLA from the fungal oil at 5.7% LGA. In case of lower oil concentration at 5–20%, η_GLA showed higher in the following order: acetone (−20°C)>n-hexane (−20°C)>acetone (4°C)>petroleum ether (−20°C). The winterization process also proved to be effective for the separation of TG type, Sa₂U (Sa; saturated fatty acid; U, unsaturated fatty acid) into the crystallized fraction and SaU₂ into the liquid fraction. Acetone at −20°C showed higher separation efficiency for triunsaturated TG than the other solvents.     

提高深黄被孢霉菌丝细胞油脂合成总量及其不饱和脂肪酸酯含量的研究

葡萄糖的添加方式对深黄被孢霉（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌａｉｓａｂｅｌｉｎａ）Ｍ０１８菌株细胞油脂的生物合成影响显著，葡萄糖流加（３０ｈ）培养所得菌体细胞油脂含量达８０．５％，比消前一次性加入培养所得菌体细胞油脂含量提高了１７．２％。Ｚｎ２＋可显著提高油脂的碘值，但对细胞油脂合成总量影响甚微。柠檬酸钠有利于菌丝细胞生长，但不利于油脂的生物合成。培养温度在２０～２５℃之间适合菌丝细胞的生长，也有利于细胞合成油脂，低温有利于不饱和脂肪酸酯的合成。Ｍ０１８菌株将葡萄糖转化合成油脂的同时，菌丝细胞形态发生显著改变，丝状细胞逐渐膨大呈球形或椭圆形。以乙醇和正已烷对菌体进行分步抽提，油脂得率最高。     

不同前体物质的添加对高山被孢霉生长及脂肪酸组分的影响

通过添加植物油及吐温作为高山被孢霉合成油脂的前体物质,分别考察了不同前体物质的添加对菌体的生物量、油脂含量、油脂产量及所得油脂中各脂肪酸组分的影响。实验结果显示:添加植物油作为前体不但可以提高菌体中油脂含量,而且会使油脂中花生四烯酸的产量得到大幅度提高,其中加入菜籽油、亚麻籽油及大豆油为前体时,花生四烯酸的产量分别达到了2 063.2、2 062.8 mg/L及2 192.9 mg/L,比对照组提高了112.72%、112.68%及126.10%;而以吐温80为前体时,虽然菌体的油脂产量有所降低,但油脂中花生四烯酸的产量比对照组提高了79.91%,达到了1 744.9 mg/L。