利用肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)方法对阪崎克罗诺杆菌进行分子分型

阪崎肠杆菌在2008年被重新命名为克罗诺杆菌属的一个新种,是一种条件致病菌,可引起严重的新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症,严重的可能引起神经系统后遗症和死亡.目前,越来越多的报道证明婴儿配方粉是其主要的传染源和传播媒介.利用肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)方法对43株克罗诺杆菌属菌株和5株肠杆菌属菌株进行分子分型,利用BioNumericus软件对其结果进行分析,如果按照相似性大于80%计算,根据辛普森方程计算该分型方法的分辨率可达到0.984.研究结果表明:ERIC-PCR是一种适用于阪崎克罗诺杆菌的快速分子分型方法,能够对由该菌引起的食品中毒事件进行快速的溯源.     

耐镉肠杆菌的分子鉴定和抗性分析

分离到一株耐镉肠杆菌NP23,对其进行了分子鉴定和抗性研究,分析菌株在不同镉浓度条件下菌体的生长状况以及对Fe²⁺,Cu²⁺,Mn²⁺,Zn²⁺等重金属抗性,利用SDS法进行质粒消除分析。结果显示,菌株NP23是Enterobacter sp,高浓度的镉使该菌株生长延滞期变长,进入对数期后的生长量相对较低,采用SDS法进行质粒消除,初步确定NP23的镉抗性基因在基因组上,NP23对所分析的四种重金属都有一定抗性,其中对Zn²⁺和Mn²⁺的抗性较强,在3200mg/L以上。      

铁盐对阪崎肠杆菌的杀菌效应研究

阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是污染婴幼儿奶粉的一种重要致病菌,现亟须开发安全、高效的杀菌剂保障婴幼儿奶粉的安全性。受铁死亡启发,探索了5种常见铁盐对阪崎肠杆菌的杀菌作用,测定其最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC),并从细胞膜完整性、细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平、脂质过氧化程度等方面探究了铁盐对阪崎肠杆菌的杀菌机制。结果发现：5种铁盐对阪崎肠杆菌均有一定程度的杀菌作用,其中氯化铁的杀菌效果最强,其MBC为200μmol/L;氯化铁处理阪崎肠杆菌后,菌体细胞膜破损,胞内ROS水平显著上升,且脂质过氧化程度加剧,而ROS清除剂N-Acetyl-L-cysteine(NAC)和铁死亡抑制剂Liproxstatin-1(Lip-1)能缓解氯化铁对阪崎肠杆菌的杀菌效果,表明外源性氯化铁会诱导阪崎肠杆菌发生铁死亡。本研究为铁盐在食品杀菌中的应用提供了理论依据,也为食源性致病菌的控制提供了新思路。     

基于内参系统的阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据阪崎肠杆菌ompA靶基因设计特异性引物和探针,并加入内参(IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法对阪崎肠杆菌基因组DNA的最低检测限为1pg;对细菌的最低检测限为1×10~4 CFU;对含有靶基因质粒的最低检测限为10~3拷贝;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R~2=0.999)。人工污染试验结果表明,在初始菌量为10CFU/25g奶粉样品时,采用水洗加试剂盒法和水煮法提取DNA,阪崎肠杆菌均在增菌10h时检出。研究结果为进一步优化和完善阪崎肠杆菌分子生物学方法的标准化提供了参考。     

含双歧杆菌的婴儿配方奶粉和原料中阪崎肠杆菌的检测

对按照GB 4789.40方法,检测含双歧杆菌的婴儿配方奶粉和原料中的阪崎肠杆菌进行了研究,发现检测结果存在假阴性风险。对检测方法进行了改进,通过添加万古霉素,或增大BPW稀释液的用量,降低了双歧杆菌对阪崎肠杆菌的抑制作用,从而避免了检测结果的假阴性,保证了婴儿配方奶粉的质量与安全。     

建立一种快速检测坂歧肠杆菌的方法

目的:建立快速检测婴儿配方奶制品(IFM)中坂歧肠杆菌的方法。方法:选择ATCC坂歧肠杆菌标准株,对不同的增菌性培养基、选择性培养基和显色培养基进行研究;结合VITEK仪和API20E细菌鉴定系统,构建快速检测配方奶制品中坂歧肠杆菌的方法。结果:建立的快速检测配方奶制品中坂歧肠杆菌的方法,所需检验流程为72h,方法灵敏度为2CUF/g,能有效区别于阴沟杆菌、产气杆菌等肠杆菌科细菌;方法应用稳定;操作简单、方法可靠,适宜规模化检测。结论:本研究认为,所建立的快速检测配方奶制品中坂歧肠杆菌的方法适宜检验检疫的工作要求,能有效地发现配方奶制品中坂歧肠杆菌的污染情况。     

奶粉中坂崎肠杆菌检测方法研究进展

坂崎肠杆菌为肠杆菌科肠杆菌属，奶粉（尤其是婴幼儿配方奶粉）中坂崎肠杆菌的污染可引发严重的公共卫生问题，其主要检测方法包括传统的细菌学培养方法及各种基于聚合酶链式反应（PcR）的分子生物学检测方法，改进的培养方法和快速特异的分子生物学方法已成为坂崎肠杆菌检测的重要发展方向。     

原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及机理

本文通过检测原儿茶醛（PC）对阪崎克罗诺肠杆菌的最小抑菌浓度及对生长曲线的影响,分析其抑菌效果;利用场发射扫描电镜,观测PC对阪崎克罗诺肠杆菌细胞形态的影响;利用多种荧光探针检测PC对细菌细胞膜完整性、胞内pH、胞内ATP浓度、膜电位的作用,探明其可能的抑菌机理。结果表明：PC对阪崎肠杆菌的最小抑菌浓度为0.625~1.25 mg/mL,PC使细菌生长速率和最大菌体浓度显著减小。扫描电镜结果表明PC使菌体干瘪皱缩,丧失原本的棒状杆菌形态。同时,浓度为2MIC和4MIC的PC使细胞膜完整性分别降低49.0%和50.7%,使胞内pH由6.87降低为5.67和4.47,使胞内ATP浓度由1.824 μmol/L降低为0.01 μmol/L以下,并且使细菌细胞膜出现去极化。综上所述,PC对阪崎克罗诺肠杆菌有良好的抑制效果,其可能的抑菌机理是影响细胞膜的通透性,原儿茶醛有潜力作为天然抑菌剂在婴幼儿食品或其他食品中使用。     

LAMP法在阪崎肠杆菌快速检测中的应用

针对阪崎肠杆菌的ompA基因设计4条特异性引物(2条内引物、2条外引物),建立一种快速检测阪崎肠杆菌的DNA环介导恒温扩增法(LAMP)。通过对2株阪崎肠杆菌标准菌株、24株阪崎肠杆菌分离株和18株非阪崎肠杆菌测试,结果表明此方法具有很高的特异性;对其灵敏度进行检验,发现该方法的最低检测限可以达到8CFU/mL,具有较好的敏感性。在1份实验室能力验证盲样和26份实际奶粉样品中应用发现,该方法与传统生化方法结果吻合,具有较好的可靠性。     

婴幼儿食品源阪崎克罗诺杆菌的3种分型方法

阪崎克罗诺杆菌污染婴幼儿食品可能导致新生儿和婴幼儿脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎,对其健康造成严重威胁。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和肠杆菌间保守重复序列PCR(ERIC-PCR)对分离于婴幼儿配方乳粉、米粉和辅食中的阪崎克罗诺杆菌进行分子分型,计算3种分型方法的辛普森多样性指数(DI)值,评价3种方法的分型效率,以便精确和快速开展阪崎克罗诺杆菌流行病学研究。PFGE、MLST和ERIC-PCR可分别将37株阪崎克罗诺杆菌分为35个PFGE基因型、28个ERIC-PCR型和23个序列(ST)型,分型结果的DI值分别为99.55%,96.40%和98.05%。3种方法对阪崎克罗诺杆菌均具有较高的分型能力,其中PFEG分型能力最高,分型效率最佳。