Ｌｉｖｉｎ特异性ｓｉＲＮＡ表达载体在胃癌细胞中的稳定表达

目的:构建以Livin基因为靶基因的siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo/Livin,获得稳定沉默Livin基因的胃癌细胞SGC-7901/siRNA-Livin.方法:化学合成siRNA,Livin寡核苷酸,将其分别克隆进载体pGPU6/GFP/Neo,进行核酸序列测定.脂质体法转染SGC-7901细胞,半定量RT-PCR和Western blot检测Livin基因在SGC-7901细胞中的沉默效率,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆.结果:酶切分析显示,所有质粒均为阳性重组载体,核酸测序表明合成的序列准确插入pGPU6/GFP/Neo载体,G418筛选基因转染SGC-7901细胞后形成稳定克隆.其中pGPU6/GFP/Neo/Livin-4转染后Livin mRNA沉默效率大于70%.结论:成功获得Livin特异性siRNA表达载体,SGC-7901细胞Livin基因的表达受到抑制,转染胃癌细胞后获得SGC-7901/siRNA-Livin细胞克隆.     

凋亡抑制基因Livin在喉鳞状细胞癌中的表达及与预后的关系

目的 分析Livin基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达情况,并探究其在喉鳞状细胞癌发生、发展及预后中的作用及机制,为喉鳞癌的临床诊断、治疗以及病情预测提供可参考依据.方法 选取2013年3月至2016年10月南充市中心医院耳鼻咽喉头颈外科经手术切除的34例喉鳞癌组织、19例癌旁组织和15例正常喉黏膜组织,分别应用SP免疫组化法检查Livin的表达情况,并结合患者的病理结果和随访资料,探究Livin表达与各临床特点以及预后的关系.结果 Livin在喉鳞癌组织中的高表达率为70.59%,在癌旁组织中的高表达率15.79%,在正常喉黏膜组织中无Livin高表达,差异有统计学意义(P<0.05);在喉鳞癌中,Livin高低表达与临床分期、淋巴结是否转移、病理分级以及病程差异有统计学意义(P<0.05),但与患者年龄、性别、肿瘤病灶大小和临床分型差异无统计学意义(P>0.05);经Cox 回归性分析发现,Livin阳性表达、病程长、淋巴结转移、病理分级和癌症晚期是影响喉鳞癌患者生存率的独立危险因素.结论 Livin基因的阳性表达在喉鳞癌的发生、发展及预后中发挥着重要作用,可将其作为判断喉鳞癌病情进展及预后的主要指标之一.     

Livin和Survivin在尖锐湿疣组织中的表达和意义

目的：探讨凋亡抑制蛋白Livin和Survivin在尖锐湿疣（CA）组织中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP法分别检测Livin和Survivin蛋白在56例CA组织和18例正常上皮组织中的表达。结果：尖锐湿疣组织中Livin和Survivin蛋白阳性表达率分别为82.14%（46/56）、85.71%（48/56）,正常人对照组分别为22.22%（4/18）、38.89%（7/18）;尖锐湿疣组织中Livin和Survivin蛋白阳性表达强度多为（＋＋）-（＋＋＋）,正常对照组多为（-）-（＋＋）。两组Livin和Survivin阳性表达率及表达强度差异均具有统计学意义（P〈0.05）。尖锐湿疣组织中Livin和Survivin表达呈负相关（r=-0.634,P〈0.01）。结论：尖锐湿疣组织中存在Livin和Survivin过表达,Livin和Survivin的过表达可能对尖锐湿疣的发生发展有一定作用。     

BPH和前列腺腺癌中Livin的表达及其意义

目的：探讨凋亡抑制因子Livin在BPH和前列腺腺癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法,用Livin单克隆抗体对10例BPH、30例前列腺腺癌和10例正常前列腺组织中Livin基因的表达进行检测,分析其在正常前列腺组织、BPH组织和前列腺腺癌组织中的表达状况,以及Livin基因的表达与前列腺腺癌病理学分级之间的关系。结果：Livin基因在10例正常前列腺组织中均不表达,而在10例BPH组织中有8例呈阳性表达（80％）,在30例前列腺腺癌中有21例呈阳性表达（70％）。Livin基因在正常组织中的阳性表达率与在BPH、前列腺腺癌中的阳性表达率差异有明显的统计学意义（P〈0．01）;Livin基因在BPH和前列腺腺癌中的阳性表达率差异无明显的统计学意义（P〉O．05）;Livin基因的表达和前列腺腺癌的分级无明显关系（P〉0．05）。结论：细胞凋亡抑制因子Livin在BPH和前列腺腺癌组织中的表达上调,提示Livin基因可能通过抑制细胞凋亡对BPH和前列腺腺癌的发生和发展起重要作用。检测Livin基因的表达对鉴定前列腺组织的良恶性方面无明显作用。     

Livin、Survivin蛋白在非小细胞肺癌胞核中的表达及意义

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin和Livin在tPA,细胞肺癌（NSCLC）细胞核中阳性表达（核阳）水平及其临床意义。方法采用免疫组织化学sP法检测40例NSCLC组织和20例癌旁正常肺组织中Survivin蛋白和Livin蛋白核阳水平。并分析其与临床特征的关系。结果在NSCLC和癌旁正常肺组织中,Survivin蛋白细胞核表达的阳性率分别为80％（32／40）和5％（1／20）,Livin蛋白细胞核表达的阳性率分别为80％（32／40）和10％（2／20）。Survivin蛋白和Livin蛋白核阳在NSCLC组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0．05）。Survivin蛋白核阳与淋巴结转移、肿瘤分期高度相关（尸〈0．05）。结论Survivin蛋白和Livin蛋白在NSCLC细胞核中高表达,可能成为NSCLC诊断的新指标和治疗的潜在靶点。     

宫颈癌中Livin和PTEN蛋白表达与预后的相关性研究

目的：探讨宫颈癌组织中Livin和PTEN蛋白表达及其与临床病理因素以及预后的关系。方法：应用免疫组化Envision法检测65例宫颈浸润性鳞状细胞癌组织中Livin和PTEN蛋白表达,分析其表达与临床病理因素以及预后的关系。结果：宫颈癌组织中Livin的表达与肿瘤的临床分期、病理学分级和淋巴结转移情况显著相关（P＆lt;0.05）,和患者的年龄无关。 PTEN在宫颈癌和正常组织中的阳性表达率比较差异有统计学意义,与临床分期和淋巴结转移相关（P＆lt;0.05）,而与患者的年龄和宫颈癌病理学分级无相关性。Livin蛋白与PTEN蛋白两者表达呈负相关（P＆lt;0.05）。在死亡组中,Livin表达明显高于生存组（P＆lt;0.05）,而PTEN表达明显低于生存组（P＆lt;0.05）。结论：宫颈癌中Livin表达上调和PTEN蛋白表达缺失,与宫颈癌的发生、发展及转移、浸润密切相关;联合检测Livin和PTEN,有助于筛选出具有高复发及转移危险的宫颈癌患者,从而指导临床治疗。     

替莫唑胺对 Livin基因过表达的胶质瘤TJ905细胞及其干细胞增殖活性的影响

目的分析替莫唑胺（TMZ）干预Livin基因过表达的胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型后对细胞增殖活性的影响,以及对胶质瘤TJ905细胞和TJ905干细胞中Livin、Caspase-3/7的作用机制。 方法使用免疫磁珠方法从胶质瘤TJ905细胞系中分选出CD133阳性胶质瘤干细胞,采用慢病毒过表达技术建立Livin过表达的细胞模型,使用不同浓度（0、25、50、100、200、400 μmol/L）的TMZ干预细胞模型48 h,采用CCK-8、流式细胞术、反转录PCR检测药物干预后细胞增殖活性、细胞周期及Livin、Caspase-3/7基因的表达量。 结果（1）胶质瘤TJ905细胞中Livin基因表达量明显高于同源TJ905干细胞,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）TMZ能抑制胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的增殖活性,降低增殖速度,并且随药物浓度的增加抑制作用逐渐增强;（3）TMZ能抑制Livin基因的表达,诱导Caspase-3/7的表达,并且随药物浓度的增加抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义（P<0.05）;（4）Livin基因转染后胶质瘤干细胞细胞周期G0/G1增加明显,而TJ905细胞周期则是G2/M期少量增加;TMZ干预细胞模型后,TJ905干细胞过表达组在S、G2/M停滞,对照组则是在S期停滞;TJ905细胞过表达组在S期停滞,对照组G2/M则是低浓度诱导停滞,随药物浓度增加其诱导作用减弱,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论TMZ可以通过抑制Livin基因的表达、诱导Caspase-3/7的表达、调控细胞周期变化来降低细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

凋亡抑制基因在急性白血病及骨髓增生异常综合征中的研究

目的探讨急性白血病及骨髓增生异常综合征患者骨髓凋亡抑制基因MCL-1、livin、aven的表达及临床意义。方法选取2012年9月~2013年12月本院收治的113例初发急性白血病患者,32例骨髓增生异常综合征患者及20例对照组患者（缺铁性贫血12例、血小板减少性紫癜8例）的新鲜骨髓液标本,采用RT-PCR方法检测MCL-1、livin、aven基因mRNA的表达水平及表达率。结果 AL组和MDS组MCL-1、livin、aven mRNA表达水平及阳性表达率分别高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。MCL-1与livin基因mRNA的表达呈正相关（r=0.586,P〈0.05）,MCL-1与aven基因的表达呈正相关（r=0.603,P〈0.05）,liven基因与aven基因表达无相关性（r=0,P〉0.05）。结论 3种凋亡抑制基因MCL-1、livin、aven基因mRNA在急性白血病及骨髓增生异常综合征中表达均增高。     

SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究

目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。     

新发现的Livin基因在结直肠癌组织中mRNA表达及其临床意义

目的 研究Livin基因在结直肠癌组织表达及其意义。方法 采用逆转录聚合酶链式扩增反应对30例结直肠癌组织、30例癌旁正常组织及10例正常成人大肠组织中Livin mRNA的表达进行检测。结果 10例正常成人大肠组织中Livin基因均无表达。结直肠癌及癌旁正常组织Livin基因表达阳性率均为100％，但癌旁正常组织Livin基因表达量较癌组织表达量明显下降，（P〈0．05），Livin基因表达量与患者的年龄、性别、肿瘤的分期、分级差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 Lvin基因表达升高与结直肠癌密切相关。可能参与结直肠癌的发生。