反义寡核苷酸治疗肿瘤

反义寡核苷酸(ASODN)治疗肿瘤具有特异性高、副作用少的特点,与化疗、放疗和靶向药物结合有协同作用,并已逐渐从实验室走向临床。现综述目前反义寡核苷酸治疗肿瘤所选择的靶点及其疗效。     

脂质体介导的99mTc标记c-myc mRNA反义寡聚核苷酸链的生物学特性研究

目的探索脂质体介导的99m Tc标记c-m yc mRNA反义寡核苷酸链的生物学特性.方法合成15bp的c-myc mRNA的反义、正义和无义寡核苷酸链,用三氯乙酸沉淀测定脂质体包裹的99mTc标记的上述寡核苷酸链(简称为99mTc-DNA)和未用脂质体包裹的99mTc-DNA的血浆蛋白结合率.用BALB/c小鼠研究不同脂质体包裹的99mTc-DNA的生物学分布.用家兔研究脂质体介导的99mTc-DNA的药代动力学特性.结果 99mTc-DNA的血浆蛋白结合率的范围为34.81% ～7 0.53%.脂质体介导的99mTc-DNA的体内分布以网状内皮系统最高,胃、血和肠道其次,其余组织中放射性分布较少.其药代动力学曲线符合开放二室模型,t1/2α约为 2～5分钟,t1/2β约为100～150分钟,血浆清除率小于2ml/min.结论 99mTc-DNA的血浆蛋白结合率高,脂质体介导的99mTc-DNA具有合适的生物半衰期,血浆清除快,是一种有开发潜力的放射性药物.     

泪小管断离吻合术的新方法

我科自 1 995年元月以来 ,采用注射针头自制鱼钩形探针固定 ,对 5例泪小管断离行泪小管吻合术 ,取得较满意的效果 ,现介绍如下 ;1　一般情况　 5例均为下泪小管断离 ,男性 ,年龄1 8～ 3 5岁 ,受伤原因 ,金属物击伤 2例 ,拳击伤 2例 ,摔伤 1例 ,创口组织边缘不整齐 ,手术时间均在伤后 2 4小时之内。2　材料与方法2 .1　鱼钩形探针的制作 ,用 5ｍｌ 1次性注射针头 ,尖端磨成钝园 ,弯曲成鱼钩形 ,酒精浸泡消毒备用。2 .2　 2 %利多卡因作筛前神经阻滞及眶下神经阻滞麻醉 ,泪点扩张器扩张上泪点 ,鱼钩形探针自上泪点插入 ,顺着上泪小管到泪囊或…     

基因芯片技术在原发性肝癌中的研究进展

应用基因芯片深入研究肿瘤基因表达谱有助于很好地定性肿瘤,确定肿瘤治疗的敏感性,判断预后,寻找新的治疗靶点。对大多数原发性肝癌患者,治疗的选择很局限,预后凶险,迫切需要对其致癌物的分子机制、肿瘤浸润、复发、转移过程、治疗的敏感性及预后判断等进行深入的探讨。现综述近年基因芯片技术在原发性肝癌中的研究进展,以期对其分子全貌有更深入的认识。     

Effect of nuclear factor-κB p65 ASOND on I typ collagen expression and rat hepatic stellate cells proliferation

Objective Sstudy effect of nuclear factor-κB ASOND on I type collagen expression and rat hepatic stellate cells(HSC)proliferation.Methods Rat HSCs were separated by affusing and digestingof Ⅳ type collagenenzyme and density acentric method.Lipid-mediated NF-κB p65 ASOND(0.001,0.01,0.1,1μmol/L)Was transferred into rat HSCs.Toxicity of HSCs caused by NF-κB p65 ASOND and activity of LDH were determined by trypan blue staining.Proliferation affection of transferring NF-κB p65 ASOND into HSCs was determined by MTT.In different concentration NF-κB p65 ASOND.expression of Ⅰ type collagen stimulated by 1mg/L TNF-αwas determined by RT-PCR and ELISA.Results After transfection of NF-κB p65 ASODN,expression of NF-κB protein in HSCs was decreasing.Toxicity experiment indicated that NF-κB p65 ASOND of different concentration(0.001,0.01,0.1 and 1.0 μmol/L)had no effect on HSCs livability and LDH activity(P<0.05).Four different concentration NF-κ B p65 ASOND could restrain HSCs proliferation stimulated by 1 mg/L TNF-α.The expression of I type collagen and mRNA stimulated by 1mg/LTNF-αwas increased,and had a positive correlation with concentration(P>0.05).Conclusion NF-κB p65 ASOND may depress NF-κB activity to restrain HSCs proliferation and Ⅰ type collagen expression,and reduce extracellular matrix.     

cDNA探针对高辛标记法检测肺中诱生型一氧化氮合成酶的表达

目的；探讨内毒素（ＬＰＳ）诱导后家兔肺组织中诱生型一氧化氮合成酶的表达。方法：采用地高辛标记ｉＮＯＳ探针，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术和比色法检测ｉＮＯＳ表达。结果：经内毒素导后ｉＮＯＳ在家兔肺组织中有表达，注射ＬＰＳ５小时后表达量最大，２４小时表达最减少。结论：地高辛标记ｉＮＯＳｃＤＮＡ探针可较好地用于ｉＮＯＳ基因表达的研究。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

非放射性HBV－DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＮＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率有显著性差异。提示：血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检测是较ＨＢｅＡｇ更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。当ＨＢｅＡｇ阴转，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性而肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性时，需注意肝硬化及肝癌的发生。     

应用地高辛标记探针检测以Vero传代细胞制备人用狂犬疫苗中残余细胞DNA含量

用地高辛标记正常Ｖｅｒｏ细胞ＤＮＡ，制成特异探针，通过与制备人用狂犬疫苗的基质Ｖｅｒｏ细胞同源ＤＮＡ杂交，检测人用狂犬疫苗中残余Ｖｅｒｏ细胞ＤＮＡ含量，达到ＷＨＯ规程中“以传代细胞制备生物制品中残余细胞ＤＮＡ含量，每剂量ＤＮＡ须低于１００ｐｇ”的检测要求。检测灵敏度可达１ｐｇ，杂交反应特异性高，重复性好。测得以Ｖｅｒｏ细胞制备人用狂犬疫苗粗制原液中残余细胞ＤＮＡ含量为１００～１０００ｐｇ／ｍｌ，超滤浓缩后为１０４～１０６ｐｇ／ｍｌ，纯化后低于１０～１００ｐｇ／ｍｌ。这对以传代细胞为基质的生物制品中残余细胞ＤＮＡ的检测提供了一种常规可行的方法，因而具有重要的应用价值