消化道肿瘤自身抗体检测

目的探讨消化道肿瘤患者针对肿瘤细胞的自身抗体的存在。方法收集肠癌患者及胃癌患者术前血清96份和健康体检人群血清62份，分组后采用Western印迹分析法定性检测消化道肿瘤患者术前血清中的自身抗体。结果正常健康人群和正常肝细胞株96％（212／220）的反应条无显色带，而97％（60／62）的肠癌患者肠癌细胞株、89％（39／44）的胃癌患者胃癌细胞株反应条均出现多个阳性带。结论健康人群体内很少产生针对肿瘤细胞的自身抗体，而大部分消化道肿瘤患者体内产生针对肿瘤相关抗原的自身抗体，这为消化道肿瘤的病因，早期诊断，预后监测及分子靶向治疗等研究提供了一个很好的线索。     

人组织中大肠癌负相关基因ST13的蛋白表达研究

目的原核表达大肠癌负相关基因ST13，制备ST13蛋白单克隆抗体，研究人大肠等组织中表达的ST13蛋白的生物学特性。方法将ST13 ORF克隆至GST融合蛋白表达质粒，原核表达并以Glutathione纯化GST—ST13蛋白，以凝血酶切得到ST13蛋白。以GST-ST13融合蛋白免疫小鼠，以ST13蛋白筛选杂交瘤细胞株，按杂交瘤技术制备ST13蛋白单克隆抗体，并以ST13蛋白亲和层析纯化单抗。以该单抗作Western—blot及免疫组化检测临床标本。结果蛋白表达和纯化以SDS-PAGE证实。融合蛋白表达量占大肠杆菌总蛋白20％，每升培养物回收融合蛋白2．5mg，纯度为91．3％。建立了3个ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株，腹水中单抗的ELISA效价达10^4-10^5，并具有对ST13蛋白的高度特异性。Western—blot证实组织细胞中天然ST13蛋白的SDS—PAGE表观分子量约50KD，比其计算分子量大约10KD，但无糖基化修饰。免疫组化表明该蛋白均匀分布于SW480细胞及大肠上皮细胞浆，计算机分析系亲水性分子。免疫组化还表明该蛋白可表达于大肠、胃及肝等多种组织上皮，但在各种正常组织和肿瘤组织之间，正常组织之间，以及肿瘤组织之间的的着色强度不一。结论原核表达了ST13蛋白，制备了相应的单抗，建立了检测组织标本中ST13蛋白的方法。研究表明人组织ST13蛋白系表观分子量50KD的细胞浆可溶性分子，可表达于大肠等多种上皮组织。ST13蛋白在大肠癌组织呈低表达，在多种正常和肿瘤组织中的表达程度不一。cDNA同源性及蛋白质特性比较表明ST13与Hip(hsp70-interacting protein)为同一蛋白质，提示ST13／Hip经Hsp70等分子伴侣途径而在大肠癌发生发展中起作用。     

H5N1亚型禽流感病毒抗原成份免疫活性的分析研究

目的 分离H5N1亚型禽流感病毒抗原成份并分析其免疫活性.方法 本研究采用SDS-PAGE和Western-blot这两种方法对H5N1亚型禽流感病毒的抗原成份进行分离分析.结果 我们发现该病毒主要有14种多肽成份,其中有有11种蛋白组成成份被禽流感多克隆阳性血清特异性识别,经免疫酶联反应后,在醋酸纤维膜上可以清晰看到棕色的条带.结论 在14种H5N1亚型禽流感病毒蛋白中有11条具有抗原性和免疫活性.     

NOS在颅内动脉瘤壁的表达

目的 通过研究一氧化氮合成酶(NOS)在颅内动脉瘤壁的表达来探讨NOS对动脉瘤形成的影响.方法 天坛医院2006年10月至2007年9月术中随机取得12例颅内动脉瘤,以同期5例脑肿瘤患者的颞浅动脉为对照,通过HE染色及Wester-blot蛋白分析法进行研究.结果 HE染色显示相对于正常动脉壁,动脉瘤其内层、外层网架结构均有破坏;Western-blot结果NOS在动脉瘤中的蛋白表达明显增高.结论 NOS在动脉瘤壁中的含量升高可能造成NO的积聚从而损伤动脉壁引起颅内动脉瘤的发生.     

对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后Survivin基因变化的研究

目的通过对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后观察Survivin基因的变化。方法设计两条针对Survivin基因CDS区不同位点的siRNA片段并构建shRNA表达载体,重组质粒使用阳离子脂质体法转染结肠癌细胞株HT-29。RT-PCR,Western-blot检测转染后mRNA及蛋白表达。结果转染shRNA重组质粒可有效抑制HT-29细胞Survivin的表达,Survivin mRNA和蛋白表达下调,表明Survivin基因沉默效果较高;两个转染组之间相比pshRNA1组Survivin基因的表达量低于pshRNA2组。结论人结肠癌细胞株中的Survivin基因表达率可通过shRNA重组质粒转染而发生变化;siRNA1和siRNA2序列中Survivin基因表达量存在统计学意义,提示我们在今后有关Survivin基因靶向治疗研究中是否需要考虑到序列的选择以提高作用效果。     

汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用

目的 应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧光法了解重组NP（rNP）表达及与特异性免疫反应情况,SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况。建立免疫印迹法检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较。结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带,此抗原仅与HFRS患者血清起反应。经双盲试验,两法检测血清143份,HFRS阳性符合率为97.67%。结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统。所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。     

卵巢癌ES-2、SK-OV3和JHOS-3细胞系TSLC1基因启动子区甲基化状态与表达

TSLC1(tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1)属肿瘤抑制基因,研究发现,恶性肿瘤中存在TSLC1基因表达降低或缺失,并且与肿瘤侵袭转移密切相关[1];并且TSLC1基因表达缺失多与启动子甲基化状态相关[2].卵巢癌是女性常见生殖系统肿瘤,较早发生侵袭和转移,严重威胁妇女的健康.本研究旨在探讨TSLC1基因在卵巢癌细胞系中CPG位点的甲基化状态及该基因的表达情况,为寻找卵巢癌基因治疗的靶点提供理论依据.     

当归红芪超滤膜提取物抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达

目的 探讨当归红芪超滤膜提取物对心肌细胞凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 用高浓度的过氧化氢(400 μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立细胞凋亡模型,用不同浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 g/L)进行治疗.光镜下观察细胞形态;逆转录-多聚酶链反应和蛋白印迹法检测bcl-2、bax蛋白在心肌细胞中的表达情况.结果 与正常对照组相比,高浓度过氧化氢损伤组bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);bax mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);bcl-2/bax比值显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义.与损伤组比较,高浓度和中浓度药物治疗组bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著增加(P<0.05);bax mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05);bcl-2/bax比值显著增加(P<0.01),差异具有统计学意义.低浓度药物治疗组则对bcl-2、bax表达无显著改变.结论 当归红芪超滤膜提取物可通过上调bcl-2/bax的比值抑制心肌细胞的凋亡,对心肌细胞具有抗凋亡的保护作用.     

醒脑开窍针刺法对缺血性中风模型大鼠基底节14—3-3tau的影响

目的：观察醒脑开窍针刺法对缺血性中风模型大鼠基底节14—3—3tau蛋白表达水平的影响。方法：成年雄性Wister大鼠随机分为醒脑开窍组、针刺对照组、假手术组、模型组,每组分为6h、24h两个时间段;除假手术组不插入线栓之外,其余各组均采用脑膜中动脉阻塞法复制缺血性中风大鼠模型,清醒之后经行为学评分合格者,醒脑开窍组选用人中穴、内关穴,针刺对照组选用曲池穴、足三里穴各针刺1次,6h组在处死之前10min再针刺1次,24h组在12h、处死前10min时分别针刺1次;各组在规定时间取缺血侧基底节,用Western—blot对结果进行分析。结果：各组针刺前后、各个时间段之间的14—3-3tau表达水平并无显著性差异。结论：①14—3-3tau在缺血性中风中也许并不参与神经的降解过程;②14-3-3tau参与缺血性中风中的神经损伤过程,表达部位不在基底节。③在缺血性中风的6h、24h时间段的病理过程中,14—3-3tau蛋白参与此病理过程,但是表达水平很低,需要进一步的手段才能进行检测。     

吡那地尔及二氮嗪对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌ＫＡＴＰ通道蛋白表达的影响

目的:研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道(KATP)蛋白表达的影响及KATP开放剂吡那地尔及二氮嗪的作用.方法:SD雄性大鼠35只随机分成对照组、低氧组、吡那地尔干预组[吡那地尔2.0 mg/(kg·d),ig]、二氮嗪干预组[二氮嗪1.5 ms/(ks·d),ig]、5-羟癸酸(5-HD) 二氮嗪干预组[5-HD 3.0 ms/(kg·d),ig;二氮嗪1.5 ms/(ks·d),ig],每组7只.将低氧组和各干预组大鼠放入常压低氧舱内[O2(10.0%±0.5%)],每周6天,每天6 h 4周后测定平均肺动脉压(mPAP)并采用Western-blot技术,分析各组肺动脉主干平滑肌KATP蛋白表达.结果:①慢性低氧组大鼠的mPAP显著高于正常对照组,吡那地尔干预组肺动脉压较低氧组显著下降.二氮嗪干预组加重慢性低氧所致的肺动脉压力升高,5.HD Z.氮嗪干预组的mPAP显著低于二氮嗪干预组,P均<0.05.②低氧组调节亚基磺酰脲受体2B(SUR2B)蛋白水平显著低于正常组,吡那地尔干预组SUR2B显著高于低氧组,二氮嗪干预组SUR2B蛋白水平显著低于低氧组,5-HD 二氮嗪干预组SUR2B显著高于二氮嗪于预组,与低氧组亦有显著统计学差异,P均<0.05.各组内向整流性孔区6.1(Kir6.1)蛋白没有显著差异(P<0.05).结论:慢性低氧抑制KATP通道蛋白的表达,而吡那地尔能提高表达,对慢性低氧所致的肺动脉高压和肺血管壁重构具有较好的预防和逆转作用;二氮嗪能加重低氧性肺动脉压升高,并抑制KATP通道蛋白的表达.