反应分离耦合酶法制备D-苹果酸

用Pimelobacter simplex DM18菌的马来酸水合酶高效转化马来酸制备D-苹果酸。为避免高浓度产物及底物对水合酶的抑制作用,利用马来酸和D-苹果酸的钙盐溶解度低的特点,以马来酸钙为底物,经水合酶催化加水转化成D-苹果酸钙,实现边反应边分离产物的反应分离耦合,同时利用钙盐和钠盐的混合反应体系提高了转化反应速率,反应36 h,可制备386g/L的D-苹果酸钙盐,相当于300 g／L D-苹果酸,转化率接近99％,光学纯度达97.03％。     

无试剂二氧化钛凝胶酶传感器检测苹果酸对映异构体研究

研制了基于TiO2凝胶的D型和L型苹果酸脱氢酶(D-MDH、L-MDH)安培电化学传感器,并用它检测果汁饮料中D-苹果酸、L-苹果酸含量。利用气相沉积法在玻碳电极表面形成的TiO2凝胶膜,为固定化的MDH提供了一个生物兼容性的微环境。在溶解氧存在的条件下,苹果酸被凝胶膜中的MDH催化氧化,其氧化产物在电位55mV下有电流响应,利用此响应值对苹果酸进行测定,测定时不需要向体系中添加媒介体。D-MDH/TiO2、L-MDH/TiO2两电极对苹果酸表现出快速的响应(响应时间小于10s)。传感器对苹果酸的测定具有较宽的线性范围(1×10-6～2×10-4mol/L)和较低的检测限(0.5×10-6mol/L)。由计算得到的固定化L-MDH和D-MDH的表观米氏常数(KMapp)分别为0.29mmol/L和0.31mmol/L。两电极具有较高的稳定性。本法快速、灵敏度高、选择性强,适合于测定果汁饮料中的苹果酸对映异构体。