溶血磷脂酸对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 :探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞 (RPE)方法。方法 :取自愿者贡献的意外事故成年眼球 ,用 0 .2 5 %胰酶消化获取人RPE细胞、置 15 %胎牛血清的DMEM培养液中培养 ,细胞接近融合状态时进行传代培养。用溶血磷脂酸 (lysophosphatidicacid ,LPA)观察RPE增殖的影响。结果 :RPE原代细胞镜下为圆形 ,大小不一 ,内含较多的色素颗粒 ,胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后第 3天增殖速度明显加快 ,至 4～ 5d即可基本融合 ,细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第 3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见微绒毛 ,细胞质内细胞器丰富 ,线粒体量多 ,体积较小 ,内外膜分界清晰 ,嵴较短。色素颗粒散在分布于胞浆内 ,多数细胞质内含量较少 ,呈高电子密度包含物。LPA对原代培养的视网膜色素上皮细胞增殖有促进作用。结论 :LPA可促进人类RPE细胞体外培养的增殖 ,第 3代培养的视网膜色素上皮细胞可保留原代细胞的生物学特性     

褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

Objective To investigate the protective effects of melatonin on the retinal pigment epithelium (RPE) against oxidative damage induced by hydrogen dioxide (H2O2) and its mechanism. Methods The RPE cells were seeded and divided into normol control group, oxidative damage group and the treatment group (treated with melatonin at the concentration of 1×10.7 mol/L,1×10-6 mol/L, 1×10-5 mol/L and 1×10-4 mol/L). The model of oxidative damage on the RPE cells was established by culturing the RPE cells with H2O2 at the concentration of 600 μmol/L for 1 hour in vitro. The cell viability of RPE cells was detected by the methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method. The degree of oxidative damage was evaluated by detecting the superoxide dismutase (SOD) and maleic dialdehyde (MDA). Apoptosis was detected qualitatively using the DNA Ladders electrophoretic mothed, and quantitatively using the Annexin V-FITC/PI double staining flow cytometry. Results Compared with normal control group, the oxidative damage group had low cell viability, low SOD and high MDA contents, and high apoptosis rate(t=2.25,39.50,68.42;P<0.05). Compared with oxidative damage group, the treatment group had high cell viability, high SOD and low M DA contents, and low apoptosis rate (P<0.05). Conclusions Melatonin has a protective effect on the RPE against oxidative damage induced by H2O2. The mechanism may involve in reinforcing the cell viability, strengthening the activity of antioxidase, and reducing the apoptosis.     

人类视网膜色素上皮细胞体外培养的转分化

目的:研究人类视网膜色素上皮细胞(human retinal pig-ment epithelium,HRPE)体外培养的转分化现象。方法:倒置显微镜观察体外培养HRPE细胞形态变化;采用免疫细胞化学染色方法检测HRPE细胞角蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化。结果:HRPE细胞体外培养时形态由上皮细胞特征变化成为间质样细胞;细胞角蛋白表达与传代代数呈负相关(r=-0.831,P<0.001),α-SMA表达与传代代数呈正相关(r=0.456,P=0.002);角蛋白18表达高密度组较低密度组强(t=2.591,P=0.027);而α-SMA表达高密度组较低密度组弱(t=2.938,P=0.015)。结论:HRPE细胞体外培养转分化主要是体内外环境差异引起。     

生长因子与视网膜色素上皮细胞免疫调节

眼后节的免疫炎症反应是由多种趋化因子、炎前因子和抗炎因子相互作用的复杂过程。RPE(retinal pigment epithelium)细胞是眼后节细胞因子的主要来源，并在炎症中作为细胞因子的靶目标。通过调节RPE细胞分泌的细胞因子有望调节眼后节的免疫炎症反应，维持视网膜结构功能的完整及内环境的稳定，清除入侵病原体和异体抗原，维持良好的视功能。本就参与RPE细胞免疫调节的细胞因子和细胞因子对眼后节免疫炎症反应的影响综述如下。     

软脉灵对大鼠糖尿病性白内障晶状体抗氧化的影响

目的:探讨软脉灵对大鼠糖尿病性白内障(diabetic catara,DC)的作用及其机理。方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病性白内障大鼠模型,将SD大鼠随机分成正常组、模型组、软脉灵高、中、低剂量组。造模后治疗组给于软脉灵治疗,连续灌胃12周,观察不同时段晶状体的变化,测定干预后各组大鼠晶状体的超氧化物化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。结果:正常组晶状体一直保持透明,STZ诱发的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠随着造模后病程的延长,晶状体混浊程度进一步加重,而软脉灵组随着剂量的增加晶状体混浊进一步减轻。与模型组比较,软脉灵可降低晶状体的MDA含量,提高SOD活性(P<0.05～0.01)。结论:软脉灵能提高DM大鼠抗氧化能力,减轻晶状体的氧化损伤,从而延缓糖尿病性白内障发生发展。     

加味补阳还五汤对糖尿病大鼠视网膜血流动力学的影响

目的:探讨加味补阳还五汤对糖尿病大鼠视网膜血流动力学的影响。方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组和加味补阳还五汤组。糖尿病组和加味补阳还五汤组大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)造模。造模后检测大鼠血液流变学参数,采用多普勒超声检测大鼠视网膜中央动脉(CRA)和视网膜中央静脉(CRV)的血流动力学参数。结果:与糖尿病组比较,加味补阳还五汤组大鼠CRA和CRV的峰值血流速度(PSV)、舒张期末流速(EDV)和平均血流速度(MV)升高,阻力指数(RI)、搏动指数(PI)降低,全血低切黏度、血浆黏度和卡松黏度降低,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:加味补阳还五汤可降低糖尿病大鼠血液黏度,增加视网膜血供。     

ARIA软件测量视网膜血管管径及迂曲度的重复性和再现性

目的：评价不同操作者使用视网膜自动图像分析(automated retinal image analyzer,ARIA)软件测量糖尿病患者视网膜血管管径和迂曲度的重复性和再现性。方法：采用前瞻性诊断性试验研究设计，由2名熟练操作者应用ARIA软件对49名糖尿病患者以视盘为中心的45°数码眼底彩照进行视网膜血管半自动分析。通过测量距离视盘0.5～1.0个视盘直径内的视网膜动静脉血管参数，各选取6条最粗的动静脉综合计算得到中央动脉管径当量(central retinal artery equivalent,CRAE)、视网膜中央静脉管径当量(central retinal vein equivalent,CRVE)、视网膜动静脉比值(arteriole-tovenuleratio,AVR)、平均视网膜动脉迂曲度(meanretinalar teriolartor tuosity,MR AT)、平均视网膜静脉迂曲度(mean retinal venular tortuosity,MRVT)。在此基础上，评价同一操作者与不同操作者间测量结果的重复性和再现性，并绘制Bland-Altman图进行...     

基因修饰骨髓间充质干细胞脑源性神经营养因子的表达变化

目的：研究基因修饰的骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)分泌脑源性神经营养因子( brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达变化。
　　方法：实验分为空白对照组(未经转染BMSC细胞)、阴性对照组(采用不含BDNF基因的空载质粒转染的BMSC细胞)和实验组(采用含BDNF基因的质粒转染的BMSC细胞)。 Realtime PCR 测定基因修饰的 BMSC 细胞 BDNF mRNA表达,ELISA测定基因修饰的BMSC细胞BDNF的分泌表达。
　　结果：实验组第3、4、5、6、7和8代 BMSC 细胞 BDNF mRNA表达高于空白对照组和阴性对照组,组间差异具有统计学意义( P3：F=491.788,P<0.05;P4：F=380.112,P<0.05;P5：F=1854.929,P<0.05;P6：F=224.540,P<0.05;P7：F=619.155,P<0.05;P8：F=10.092,P<0.05)。实验组BMSC细胞随着细胞传代,BDNF mRNA表达逐渐下降,不同代数间差异具有统计学意义(F=298.603,P<0.05)。实验组3、4、5、6、7和8代BMSC细胞BDNF的分泌表达高于空白对照组和阴性对照组,组间差异具有统计学意义(P3：F=520.609,P<0.05;P4：F=734.520,P<0.05;P5：F=152.847,P<0.05;P6：F=80.372,P<0.05;P7：F=96.083, P<0.05;P8：F=38.532,P<0.05)。实验组BMSC细胞随着细胞传代,BDNF的分泌表达逐渐下降,不同代数间差异具有统计学差异(F=230.084,P<0.05)。
　　结论：通过基因工程可增强BMSC细胞表达BDNF。     

CTGF反义寡核苷酸对人晶状体上皮细胞转分化的探讨

目的:探讨结缔组织生长因子反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs)合成CTGF与α-SMA表达的影响。方法:测定CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染率;应用CTGF反义寡核苷酸直接转染第3代HLECs进行细胞生长曲线的测定;采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞CTGF和α-SMAmRNA水平。结果:直接导入法反义寡核苷酸进入较慢,但72h未出现细胞毒性。CTGF-ASON直接导入法培养细胞72h后可见对细胞增殖抑制作用。直接导入法处理48h后,TGF-β1刺激能显著增加CTGF以及α-SMAmRNA的表达,但却可被CTGF-ASON直接导入法所抑制,而错义寡核苷酸却没有这种作用。结论:CTGF反义寡核苷酸直接转染HLECs能抑制TGF-β1诱导的CTGF与α-SMA表达上调,提示阻断CTGF可能是防治后发性白内障的有效手段。