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从cDNA文库中筛选分析阳性克隆的简便方法 总被引:2,自引:0,他引:2
cDNA文库中阳性克隆的传统筛选分析法既费时又费力.利用微波炉加热的方法,简化了原位杂交中噬菌斑裂解、DNA变性与固定的程序;进一步运用PCR扩增技术,特异扩增克隆载体中插入的cDNA片段,加快了阳性克隆分析的进程. 相似文献
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毛白杨遗传转化系统优化的研究 总被引:25,自引:0,他引:25
研究了影响根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens(Smith et Townsend)Conn)介导的毛白杨(Populus tomentosa Carr.)遗传转化的若干因素,建立了毛白简单,高铲的遗传转化系统,获得了大量正常转基因植株。在共培养培养基中附加200μmol/L的乙酰丁香酮的同时降低pH值可以显著提高毛白杨转化频率 相似文献
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的 … 总被引:9,自引:1,他引:9
大豆Kuniz型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有抗虫特性。从未成熟的大豆子叶中提取总RNA,然后转录成单链cDNA,以此为模板,用PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因,并克隆到pBluescript KS的SmaⅠ位点上。序列分析表明:克隆片段大小为663bp,包含了基因完整的编码序列。 相似文献
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以下胚轴、带柄子叶和茎尖为外植体,利用根癌农杆菌和基因枪法将抗虫融合蛋白基因(Bt-CpTI)导人甘蓝品种“中甘8号”,得到了13株卡那霉素抗性植株。经PCR扩增反应和Southern blot分子验证表明:农杆菌介导转化下胚轴和带柄子叶来源的Ⅰ型抗性植株均为转基因植株,而农杆菌介导转化茎尖外植体得到的Ⅱ型抗性植株属“假阳性”植株,基因枪介导转化茎尖的2株Ⅲ型植株中,有1株是非转基因植株。经胰蛋白酶抑制剂活性分析和抗虫测试证明,部分转基因植株有较高的胰蛋白酶抑制剂活性和抗菜青虫能力。 相似文献
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病毒诱导的PVX cp转基因沉默及其DNA甲基化 总被引:1,自引:0,他引:1
利用PCR方法获得了马铃薯X病毒(PVX)外壳蛋白(CP)基因(cp),并将其构建到植物表达载体中,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。Northern杂交及Run on实验表明有3株转基因烟草发生了转录后基因沉默。发生沉默的cp基因的甲基化分析结果表明,发生转录后基因沉默的cp基因发生了不同程度的甲基化,说明DNA甲基化并没有完全抑制cp基因的转录。利用PVX病毒对外壳蛋白正常表达的转基因烟草进行接毒,Northern杂交检测结果表明,病毒诱导cp发生了基因沉默。进一步的Run on结果表明,转基因烟草中cp基因在沉默前后转录速率并没有发生变化,说明病毒诱导的沉默是一种转录后沉默。对cp基因沉默前后的甲基化分析表明,病毒的侵染导致了cp基因甲基化程度的增加。 相似文献
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The first intron (EPI) of rice 5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase gene was isolated by PCR from one clone with genomic
EPSP synthase gene. Sequence analysis showed that the first intron is 704 bp in length with 36.2% G+C content. To investigate
its effect on expression of foreign gene, we inserted the first intron between CaMV35S promoter and β-glucuronidase (GUS)
gene. The transient expression results showed that GUS could be expressed effectively with EPI. The GUS activity in transgenic
tobacco shows that the EPI can greatly enhance the expression level of β-glucuronidase (P < 0.01) compared with transgenic tobacco without the first intron, and 3-to 6-fold increase in GUS activity in some transgenic
tobaccos. Northern blot indicated the first intron was spliced from GUS pre-mRNA, and the steady-state mRNA levels of GUS
with EPI in transgenic tobaccos were higher than that in transgenic tobacco without EPI, which suggested that the first intron
of EPSP was a non-translated intron. 相似文献
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