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p-Smad2/3、Smad7在大鼠实验性肾间质纤维化模型中的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
目的观察TGF-β1/Sm ads信号传导途径在大鼠肾间质纤维化中的表达。方法W istar大鼠分为对照组、假手术组及模型组。行单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾梗阻模型,分别于术后第3、6、14和28天处死动物。MASSON染色观察肾间质病变程度,免疫组化检测TGF-β1、p-Sm ad2/3、I型胶原以及α-SMA的改变,W estern b lot和RT-PCR方法分别检测TGF-β1、p-Sm ad2/3、Sm ad7蛋白及其mRNA表达水平。结果与对照组、假手术组相比,模型组于术后3天肾TGF-β1蛋白及mRNA、p-Sm ad2/3蛋白水平开始升高,Sm ad7蛋白表达开始减少而mRNA水平却升高,同时I型胶原、α-SMA水平升高。第14天TGF-β1、Sm ad7的变化达到峰值(P<0.01),在第28天有所回落。结论TGF-β1/Sm ads信号传导途径在肾间质纤维化形成中可能起着重要促细胞外基质沉积的作用。 相似文献
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目的观察氟伐他汀对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及ERK1/2信号通路的影响。方法将肾小管上皮细胞(HKC)分为对照组、AGEs刺激组、AGEs加氟伐他汀组和AGEs加ERK1/2阻断剂PD98059组,采用免疫细胞化学检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot检测α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadher-in)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)及其磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和Col I蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调;AGEs刺激细胞15minp-ERK1/2表达明显增强,1h达到高峰。PD98059和氟伐他汀能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及ERK1/2的磷酸化;减少TGF-β1的含量;下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达;同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论氟伐他汀抑制AGEs诱导肾小管上皮细胞转分化和胶原I的合成可能是通过抑制ERK1/2信号通路活化实现的。 相似文献
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目的观察抗氧化肽SS-31对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法将体外培养小鼠肾小球系膜细胞分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SS-31组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK及细胞色素C的表达。结果与正常糖组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleavedcaspase-3和p-p38 MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素C易位。SS-31干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论 SS-31能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制p38MAPK信号通路激活而实现的。 相似文献
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目的探讨血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及转录因子GADDl53/CHOP表达的影响。方法单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病,每日灌胃给予氯沙坦(40 mg.kg-1)共8周。应用免疫组织化学检测细胞增殖核抗原(Proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)、GRP78和转录因子GADDl53/CHOP的表达与定位,TUNEL染色检测细胞凋亡部位,流式细胞术检测细胞凋亡程度,并对GRP78、GADDl53/CHOP表达水平进行半定量分析,同时观察尿蛋白、BUN、Scr、Ucr等反应肾功能的相关指标。结果建模8周,糖尿病组大鼠较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,GRP78、GADDl53/CHOP表达增强。氯沙坦治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,GRP78表达减弱,明显抑制GADDl53/CHOP的表达。3组间PCNA阳性细胞数无差异。结论氯沙坦部分通过影响内质网应激中GADDl53/CHOP凋亡途径减少肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。 相似文献
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目的:观察NLRP3在糖尿病肾组织炎症及胆固醇代谢中的作用及机制。方法:实验小鼠分为4组:对照(WT)组、糖尿病(WT+STZ)组、NLRP3基因敲除(NKO)组和NLRP3基因敲除+糖尿病(NKO+STZ)组。腹腔注射STZ构建糖尿病小鼠模型。观察小鼠血尿生化指标及肾组织形态学;电镜及油红O染色观察肾组织脂滴形成情况;Western blot方法检测NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18及胆固醇代谢指标SCAP、SREBP-2、HMGCR、LDLR、LXRα和ABCA1的蛋白表达情况及p38 MAPK的磷酸化情况。结果:与WT组小鼠相比,糖尿病小鼠肾组织的NLRP3表达和p38 MAPK的磷酸化水平显著升高;肾组织内炎症明显,胆固醇含量增加伴肾功能受损;敲除NLRP3显著减轻糖尿病小鼠肾组织炎症反应及胆固醇沉积,同时抑制p38 MAPK的磷酸化。结论:NLRP3介导的炎症反应在糖尿病肾损伤及脂代谢异常中发挥重要作用,这种作用可能与p38 MAPK信号通路的活化密切相关。 相似文献
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目的观察沉默调节蛋白1(Sirt1)过表达对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制研究。方法将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常对照组、TGF-β1刺激组及TGF-β1+Sirt1过表达组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞术及hoechst33258染色法分别检测细胞凋亡百分比;蛋白质印迹法检测Sirt1、结缔组织生长因子(CTGF)、Bax、Bcl-2的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-PCR)检测Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2m RNA水平;活性比色法检测Sirt1活性;免疫细胞化学方法检测Sirt1表达。结果与正常对照组相比,TGF-β1刺激组肾小管上皮细胞Sirt1表达及活性均显著下降,同时CTGFm RNA及蛋白水平显著上升,细胞凋亡百分比明显增加(P<0.01),Bax/Bcl-2比率明显升高(P<0.05)。Sirt1过表达能够显著抑制TGF-β1诱导的CTGF水平升高,降低肾小管上皮细胞凋亡百分比,减少Bax/Bcl-2比率(P<0.05)。结论 Sirt1过表达能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,并且该作用的实现可能是部分通过抑制CTGF实现的。 相似文献
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血管生成素(angiopoietins,Ang)是血管生长因子家族中的一员,目前已知该家族包括Ang1,2,3,4四个成员,研究最透彻的是/Mag1和2。有关该家族成员在肾脏中的相关研究正日益增多。现就Ang1和Ang2在肾脏发育及病变中的作用作一综述。 相似文献
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靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响 总被引:3,自引:2,他引:1
目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。 相似文献
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目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中信号转导和转录活化因子1、3的改变以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用W estern印迹检测信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)和放免法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白(F ibronectin,FN)和IV型胶原的含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA的表达。结果与低糖对照组相比,高糖组系膜细胞p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,TGF-β1、FN和IV型胶原含量增加,TGF-β1mRNA的表达增加。缬沙坦组p-STAT1和p-STAT3的表达明显下调,TGF-β1、FN和IV型胶原的含量减少,同时TGF-β1mRNA的表达降低。结论高糖状态下p-STAT1和p-STAT3表达明显升高,缬沙坦抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现。 相似文献