雌激素对去势大鼠肝脂肪变性影响及炎性机制

目的 观察雌激素对去势大鼠肝脂肪变作用,探讨雌激素肝保护作用及可能机制。方法 6周SD雌性大鼠随机分为3组:假手术组、手术组和雌二醇组,术后 1 周,雌二醇组大鼠每天灌胃戊酸雌二醇(1 mg/kg)水溶液,其他组大鼠给予蒸馏水,连续12周。进行胰岛素耐量试验,采用酶联免疫法测定肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量。苏木素-伊红染色观察肝脂肪变性和炎症状况。结果 与假手术组比较,手术组大鼠体重、肝重、内脏脂肪重量[分别为(439.9±53.1)、(12.6±1.9)、(29.6±12.1)g]及血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平[分别为(57.8±5.4)、(128.4±10.1)U/L]明显升高(P < 0.05);与手术组比较,雌二醇组大鼠体重、肝重、内脏脂肪重量[分别为(387.3±40.7)、(10.3±2.1)、(24.1±6.5)g]及血清ALT、AST水平[分别为(44.5±4.8)、(98.2±9.6)U/L]明显降低(P < 0.05)。手术组大鼠肝小叶结构模糊,肝索排列紊乱,有广泛的脂滴形成,小叶内及汇管区可见炎症细胞浸润;雌二醇组大鼠肝小叶结构仍欠清晰,脂滴明显减少,且脂滴明显变小;与手术组比较,雌二醇组大鼠肝脂肪变程度及小叶内炎症程度显著减轻。与假手术组比较,手术组大鼠肝组织匀浆中TNF-α、IL-6、MCP-1含量[分别为(186.3±17.2)、(187.6±26.5)、(112.3±22.4)pg/mL]明显升高(P < 0.05);与手术组比较,雌二醇组大鼠肝组织匀浆中TNF-α、IL-6、MCP-1含量[分别为(132.6±8.6)、(110.8±21.2)、(89.1±10.8)pg/mL]明显降低(P < 0.05)。结论 雌激素可减轻去势大鼠肝脂肪变性程度,其机制可能与降低肝组织炎性因子表达有关。     

17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP-1基因表达的作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法　用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果　半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论　E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。     

随增龄不同骨骼部位骨密度减少的性别差异

目的 了解随增龄骨密度（BMD）减少的性别差异。方法 采用双能X线（DXA）骨密度仪，测量1133例（女性796例，男性337例）60～84岁的老年志愿者腰椎正位（L1～L4）、腰椎侧位（L2-L4）、髋部和前臂远端的BMD。结果 女性股骨颈和前臂远端1／3处的BMD与年龄分别呈3次回归模型和线性回归模型关系，女性其他骨骼部位及男性所有骨骼部位的BMD与年龄均呈复合曲线模型关系；女性不同骨骼部位的BMD平均累积丢失（20．5±8．5）％，范围-32．5％～-9．6％，男性丢失（10．9±4．7）％，范围-18．9％～-5．1％。BMD丢失最多的骨骼部位是前臂远端，女性和男性分别丢失32．5％和18．9％。老年女性各骨骼部位BMD平均每10年减少8．6％，男性减少4．5％。结论 老年人各骨骼部位BMD的丢失存在性别差异；衰老所致的骨丢失率，女性高于男性。髋部和前臂远端是老年人骨丢失的敏感部位，测量这两个骨骼部位，将有利于老年人低骨量和骨质疏松的检出率。     

左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察左旋肉毒碱(L-carnitine,L-C)对人成骨细胞增殖和凋亡的作用。方法以3H掺入法(3H-TdR)测定左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖的影响;以吖啶橙/溴化乙啶染色和细胞凋亡ELISA(酶联免疫吸附法)试剂盒测定左旋肉毒碱对人成骨细胞凋亡的影响;以免疫印记法检测左旋肉毒碱干预前后活化型Caspase-3、-9蛋白质表达水平的改变。结果10~100mmol/L左旋肉毒碱能促进人成骨细胞增殖。吖啶橙/溴乙啶染色法示100mmol/L左旋肉毒碱干预使人成骨细胞凋亡细胞明显减少。ELISA结果示10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可显著抑制人成骨细胞凋亡。10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可抑制无血清饥饿诱导的人成骨细胞caspase-3、9活化增加。结论左旋肉毒碱促进人成骨细胞增殖,并通过下调Caspase-3、-9的活化抑制人成骨细胞凋亡。     

人成骨肉瘤MG-63细胞雌激素相关基因的分离

目的 :筛查 17β雌二醇 (17β estradiol,E2 )诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞株差异表达cDNA片段 ,寻找雌激素相关基因。方法 :改良的cDNA代表性差异分析法 (cDNArepresentationaldifferenceanalysis,cDNARDA)分离E2 干预MG 6 3细胞株表达上调cDNA片段 ,经Southern和快速Northern杂交证实表达上调的cDNA片段来源后 ,将其克隆到 pGEM Teasy载体 ,蓝白筛选后挑取阳性克隆进行测序和同源比较分析 ,最后选取其中部分克隆行Northern印迹杂交。结果 :第 4轮消减杂交得到 5个E2 诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞表达上调的差异cDNA条带 ,Southern和快速Northern杂交证明表达上调的cDNA片段来自E2 干预的MG 6 3细胞 ;随机选 2 5个克隆测序得到13个序列 ,7个与已知基因高度同源 ;其中 2个克隆经Northern杂交证实E2 干预后表达上调。结论 :cDNARDA能有效筛查差异表达基因 ,人成骨肉瘤MG 6 3细胞中某些基因受雌激素诱导表达上调 ,可能与绝经后骨质疏松的发病相关。     

重组结缔组织生长因子对体外培养成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响

目的:研究发现,结缔组织生长因子可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖及其表型的发生,在骨骼发育以及骨量维持方面发挥重要作用,但其对成骨细胞的作用机制目前尚不清楚。观察重组结缔组织生长因子对体外培养人成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响。方法:实验于2006-01/2007-01在日照市人民医院完成。①实验材料:外科手术取正常成人髂骨松质骨,患者对试验知情同意。②实验方法:体外培养正常人成骨细胞,用不同浓度0,50,100,200,1000μg/L的重组结缔组织生长因子(0μg/L作为空白对照组)干预48h后,抽提细胞总RNA和总蛋白。③实验评估:采用半定量反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析方法观察不同浓度重组结缔组织生长因子对体外培养人成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响。结果:半定量反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹结果显示,50,100,200,1000μg/L重组结缔组织生长因子干预后均可显著上调成骨细胞核结合因子α1的表达,并呈明显剂量依赖关系,与空白对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:重组结缔组织生长因子可剂量依赖性上调成骨细胞核结合因子α1基因的表达,核结合因子α1可能参与了结缔组织生长因子对成骨细胞增殖和分化的调节。     

雌二醇诱导人成骨样MG-63细胞表达下调基因的筛查

目的 筛查17β雌二醇（E2）诱导MG-63细胞下调表达cDNA片段，寻找MG-63细胞中E2相关基因，探讨雌激素的骨保护作用机制。方法 用改良cDNA代表性差异分析法筛查E2干预MG-63细胞表达下调的cDNA片段，Southern杂交和快速Northern杂交分析cDNA片段来源后。克隆到pGEM-Teasy载体，蓝白筛选挑取阳性克隆进行测序和同源性比较分析。最后选取部分阳性差异表达克隆行Northern杂交分析。结果 得到2个表达下调的cDNA条带，证实差异表达cDNA片段经E2干预后表达下调。随机挑取20个克隆测序得到19个序列，分别代表14个不同基因，均与已知基因高度同源，这些基因与骨基质形成、转录信号转导及细胞分化发育调节等相关，其中1个克隆经Northern杂交证实其受E2干预表达下调。结论 cDNA代表性差异分析法可快速筛查差异表达基因。MG-63细胞受E2诱导下调表达的部分基因可能参与了雌激素介导的骨重建过程从而起到骨保护作用。     

2型糖尿病患者视黄醇结合蛋白4与炎症因子、脂代谢及胰岛素抵抗的相关分析

目的探讨RBP-4对与2型糖尿病患者炎症因子超敏C反应蛋白（hs—CRP）、脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法105例门诊初诊患者及同期门诊或体检中心健康体检者,正常葡萄糖耐量（NGT）组34例和T2DM组71例,按BM1分为正常体重组（NW）56例及超重／肥胖组（OW／OB）49例。用ELISA测定血清RBP-4。全自动生化仪检测hs—CRP、游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（Tc）;化学发光法检测胰岛素。结果T2DM组ln（HOMA—IR）、TG、FFA、In（hs—CRP）均高于NGR组[1．20±0．38VS0．76±0．34,（2．74±2．20）mmol／L vs（1．88±1．41）mmol／L,（0．80±0．29）mmol／L vs（0．61±0．22）mmol／L,0．62±1．00 vs -0．17±1．07],差异有统计学意义。单因素简单相关分析显示,NGR组lnRBP-4与In（HOMA-IR）存在正相关（r=0．382,P〈0．05）,与TC、TG、FFA、in（hs．CRP）无关。T2DM组,lnRBP-4与FFA、In（hs—CRP）呈正相关（r=0．242,P〈0．05;r=0．346,P〈0．01）,但与in（HOMA—IR）、TC、TG均无相关性。NW组,lnRBP-4与ln（HOMA—IR）、TC、TG、FFA、ln（hs-CRP）均无相关性。而OW／OB组,lnRBP-4与ln（HOMA—IR）、In（hs—CRP）呈正相关（r=0．290,0．295,P〈0．05）,但与TC、TG、FFA无关。逐步多元线性回归分析显示,各组的ln（hs—CRP）、TC、TG、FFA、in（HOMA—IR）均非lnRBP-4的独立影响因素。结论在T2DM患者中,RBP-4与ln（hs．CRP）、FFA正相关,可作为一新的炎症标志物。     

结缔组织生长因子与软骨细胞及成骨细胞的增殖分化

肥大带软骨细胞和功能活跃的成骨细胞均可高水平表达结缔组织生长因子(CTGF),CTGF可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖,促进软骨细胞(如X型胶原)和成骨细胞相关表型(如碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原)的发生,在骨和软骨的发育以及骨量维持方面发挥重要作用。另外,CTGF还参与了骨折愈合及病变软骨的修复过程。转化生长因子-β、前列腺素E2等可能参与了CTGF基因表达的调控。     

雌激素受体基因多态性与绝经后女性代谢综合征的相关性研究

目的：观察雌激素受体（ER）α和β基因多态与绝经后女性代谢综合征（MS）的关系。方法311例无亲缘关系的绝经后MS患者和231例年龄相匹配的健康对照人群,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术,检测ERα（XbaⅠ、PvuⅡ）和β基因（RsaⅠ、AluⅠ）多态性,并采用SHEsis在线计算平台进行统计学分析。结果与对照组相比,MS患者体重、BMI、SBP、DBP以及血清FBS、GSP、TG水平显著高于对照组,而HDLC水平显著低于对照组（P＜0．05）;对照组和MS组PP、Pp、pp基因型和P、p等位基因分布频率分别为13．0％、52．8％、34．2％、39．4％、60．6％和9．3％、51．1％、39．5％、34．9％、65．1％,XX、Xx、xx基因型和X、x等位基因分布频率分别为4．3％、48．1％、47．6％、28．4％、71．6％和3．9％、39．2％、56．9％、23．5％、76．5％,AA、Aa、aa基因型和A、a等位基因分布频率分别为73．2％、24．7％、2．2％、85．5％、14．5％和74．0％、24．1％、1．9％、86．0％、14．0％,两组间上述三个酶切位点的基因型及等位基因分布频率均无显著差异（P＞0．05）;对照组和MS组RR、Rr、rr基因型和R、r等位基因分布频率分别为45．0％、44．6％、10．4％、67．3％、32．7％和54．7％、38．9％、6．4％、74．1％、25．9％,MS组RR基因型和R等位基因分布频率显著高于对照组,Rr、rr基因型和r等位基因分布频率显著低于对照组（P＜0．05）;单体型分析显示,R-A单体型在MS组所占的频率显著高于对照组（OR：1．405;95％CI：1．100-1．769;P＜0．05）,而r-A单体型所占频率显著降低（OR：0．700,95％CI：0．536-0．915;P＜0．05）。结论ERα基因多态性与绝经后女性MS无相关性,而ERβRsaⅠ酶切位点基因多态性与绝经后女性MS患者的遗传易感性有关,R等位基因可能是其易感等位基因,而r?