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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为102 TCID50。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为103和101 TCID50。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。 相似文献
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小反刍兽疫疫苗毒株与强毒株的鉴别性荧光RT-PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行分析,设计引物与探针,建立PPRV通用型与Ⅱ系疫苗毒特异型二重实时荧光RT-PCR方法,同时建立针对PPRVIV系强毒株的特异型荧光PCR方法。特异性试验和灵敏度试验表明:建立的二重荧光RT-PCR方法可特异性检测PPRV病毒,其HEX信号通道(通用型)和TAMRA信号通道(Ⅱ系疫苗毒特异型)的检测灵敏度分别可达10^1 TCID50/mL和10^2 TCID50/mL,完全满足PPRV的检测要求。用二重荧光RT-PCR方法对西藏采集的14份羊血清样品进行检测,并用建立的Ⅳ系强毒株特异型荧光PCR方法对二重荧光RT-PCR的检测效果进行评估,结果显示,该方法可有效甄别PPRV强毒株和疫苗毒株,避免假阳性结果的出现。 相似文献
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为评价检科1号消毒剂对鸡只的急性刺激和亚慢性毒性影响,将AA肉鸡分成8个试验组,其中4个试验组用于急性刺激试验,4个试验组用于亚慢性毒性试验。急性刺激试验采用4个不同的喷雾浓度:空白对照(自来水)、喷雾使用浓度组(按说明书喷雾使用浓度)、5倍喷雾使用浓度组、10倍喷雾使用浓度组;亚慢性毒性试验采用喷雾1次加4个不同的饮水浓度:自来水、1倍饮水浓度、5倍饮水浓度、10倍饮水浓度。试验结果表明,检科1号消毒剂在使用浓度时对鸡只的急性刺激作用较小,对鸡只的血液学指标、组织学等方面几乎没有影响,对鸡只的增重亦没有显著影响。这表明检科1号消毒剂用于带鸡消毒是安全的。 相似文献
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诊断敏感性和特异性是诊断方法验证过程中的两个重要参数。本文通过分析和比较,详细阐述了诊断敏感性和特异性在动物检疫工作中的重要性,厘清了其与分析敏感性和特异性的区别。通过计算分析比较了不同流行率对检测结果可信度的影响,以及在同一流行率下,诊断敏感性和特异性变化对检测结果可信度的影响。结果显示,当流行率低时,诊断特异性对结果可信度的影响更大,诊断特异性的降低会导致阳性检测结果可信度显著下降。因此在进出境动物检疫工作中,不要一味强调分析特性,而要重视诊断特性;既要关注诊断敏感性,做到不漏检;也要关注诊断特异性,做到不误检。 相似文献
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转人溶菌酶基因奶牛多重PCR快速检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品进出境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)设计奶牛内源性基因引物,根据外源基因人溶菌酶基因(human lysozyme,hLY)及标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。结果表明,建立的方法灵敏、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。 相似文献
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为满足口岸对南非II型口蹄疫检测、监测的需求,在对南非II型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上,进行融合蛋白pGEX—VP1-VP3的体外表达,采用柱上酶切方法制备VP1-VP3蛋白。将纯化VP1-VP3抗原包被96微孔板,分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度,确定阴性临界值。经反复优化,建立的南非II型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6.4ug/ml,血清最佳稀释度为1:200,酶标二抗最佳稀释度为1:4000,阴性临界值(0D450)为0.562。检测样品判定标准为:OD450〉0.622为阳性,OD450〈0.502为阴性,0.502≤OD450≤0.622为可疑。特异性试验结果表明,所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应。南非II型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法。 相似文献
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建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品进出境监测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据转基因奶牛内源基因β2-微球蛋白基因(β2-microglobulin,B2 M),外源基因人血清白蛋白基因(Human α-lactalbumin,α-LA)及标记基因绿色荧光蛋白基因(EGFP)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。该方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。 相似文献
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在全球多地发生新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的背景下,已有部分国家(地区)对我国货物贸易进行管制。为维护我国正常出口贸易秩序,参考世界卫生组织、世界动物卫生组织等国际组织的疫病风险分析流程,对我国出口动物及动物产品传带新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的风险进行定性分析。分析认为:目前我国出口活动物感染或携带SARS-CoV-2的风险极低;按照正常程序生产和加工的出口动物源性产品携带、污染并传播SARS-CoV-2的风险极低;我国相关部门已采取了的严格的防控措施,最大程度降低了出口动物及动物源性产品的SARS-CoV-2污染风险。综上,我国出口动物及动物产品携带或传播SARS-CoV-2的风险极低。建议各国通过共同协作,加强COVID-19防控,以降低COVID-19对相互间出口贸易的影响。 相似文献