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取3个分离于山东地区几个鸡场IBDV野毒株IBDV SD01、IBDV SD02、IBDV SD03,利用Trizol试剂提取IBDV RNA,设计特定的引物,通过RT-PCR和Nested-PCR,获得分离株的VP2基因高变区的特定序列,并对其进行克隆和序列分析结果表明,分离的3个野毒株在VP2高变区与超强毒株HK46有较高的同源性,关键氨基酸位点都符合超强毒株的特征,与一般的强毒株、变异株和疫苗株的亲缘关系较远。这些关键位点氨基酸的变化使vvIBDV能够逃脱低毒力抗原所产生抗体的捕捉,导致了免疫鸡的发病。 相似文献
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用RT-PCR扩增鸭源坦布苏病毒YY5株的E蛋白基因片段,分别插入到表达载体pMBP-c、pET-GST、pET-His、pET-DsbA中,构建了一系列原核表达载体,转化人大肠杆菌E.coli Trans10或DE3(plysS)宿主菌。工程菌株经诱导后进行SDS-PAGE,结果显示MBP-E融合蛋白得到了有效表达并且以可溶性蛋白的形式存在,且能与自然感染康复的鸭源多抗和鼠源单抗反应。以MBP-E免疫小鼠制备的高免血清,在体外可以中和DDTMUV,中和抗体效价达到1:46。重组蛋白MBP-E具有良好的免疫反应原性、免疫原性和体外免疫保护特性,这为进一步研制DTMUV重组亚单位疫苗奠定基础。 相似文献
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为制备鸡源宿主限制因子SAMHD1(chSAMHD1)的多克隆抗体,本试验根据chSAMHD1基因序列设计引物,扩增部分chSAMHD1片段,构建p ET-chSAMHD1原核表达质粒,并将其转化至BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导和镍柱亲和层析纯化获得重组chSAMHD1蛋白。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗chSAMHD1多克隆抗体,通过Westernblot和IFA测定多克隆抗体的反应性。结果显示,chSAMHD1重组蛋白的相对分子质量约为75.0 k Da,与预期大小一致;重组蛋白以包涵体形式表达;所制备的chSAMHD1多克隆抗体效价达到1:512 000;IFA结果证实,本试验所制备多克隆抗体能够特异性识别DF-1细胞中过表达的chSAMHD1蛋白。以上结果表明,该研究成功制备了chSAMHD1蛋白多克隆抗体,从而为鸡源SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。 相似文献
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国外禽流感研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
禽流感病毒广泛分布于世界各地,是一种急性传染病,每一次暴发都给养禽业造成巨大的经济损失。1流行范围美国自1929年以来,仅鸡就先后有名次流感病暴发(1975年,阿拉巴马州,H4N8型;1978年,明尼苏达州,H6N1型;1983~1984年,宾夕法尼亚州,H5N2型;1985~1986年,纽约、新泽西州、马萨诸塞州和俄亥俄州,H5N5型),其中在阿拉巴马州和宾夕法尼亚州暴发的两次死亡率高。目前,美国从美洲鸵鸟和超鹊身上分离到禽流感病毒,Panigrahy和Serine列举了从这些鸟类分离到的病毒,其中1992年暴发的为H3N2型,1993年暴发的为H4N2型、H5N… 相似文献
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鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用vero细胞增殖的IBDV抗原建立了间接ELISA,用于定量检测IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明,研制的试剂盒在-20℃保存至6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试刺盒对同样血清样品检测,符合率为86.7%。间接ELISA试剂盒与琼扩试验的符合率为92,5%。该试刺盒可对大量血清样品进行检测,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速,更适合于大型鸡场IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。 相似文献