稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1、3A和3B mRNA的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1、3A和3B在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用real-time PCR技术检测10例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈组织DNMT1、3A和3BmRNA的表达。结果宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 1mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.30±0.1、0.26±0.12和0.10±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 1表达有显著差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT3A mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.94±0.27、0.51±0.24和0.13±0.04,三组相比较有显著性差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 3B mRNA对GAPDH mR-NA的相对丰度值分别是0.30±0.09、0.28±0.11和0.11±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 3B表达有显著差异（P〈0.05）。结论 DNMT1、3A和3B参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了一定作用。     

FGF2的生物信息学分析及其在低氧神经保护中的作用研究*

目的: 观察FGF2在低氧及低氧预适应条件下小鼠海马神经元细胞中的表达变化,探究FGF2是否参与低氧耐受神经保护作用。方法: 使用生物信息学方法进行搜索和鉴定FGF2基因家族成员。在细胞层面建立低氧和低氧预适应模型,通过Western-blot、qRT-PCR检测细胞中FGF2表达情况。结果: FGFs家族分为7个亚家族,其中FGF2含有一个由17个氨基酸组成的FGF受体结合域,能够与特定的FGF受体结合进行信号的转导。在细胞层面,相比于空白对照组(C),低氧组(H)和低氧预适应组(HPC)FGF2在mRNA水平和蛋白水平的表达均有所下降(P＜0.05),而与H组相比,HPC组FGF2 mRNA水平和蛋白水平的表达有所升高(P＜0.05)。结论: FGF参与低氧预适应的神经保护作用。     

幼羊颅骨缺损修复中LncRNA的差异性表达及作用

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)基因在幼羊颅骨缺损修复的差异性表达及改善颅骨缺损的作用.方法 将12只1月龄的小尾寒羊分成2组:原生骨组织组、新生骨组织组,每组6只.通过高通量测序检测两组骨组织内LncRNA的表达变化,通过Real-time PCR验证测序LncRNA表达量的变化.ELISA法检测血清中碱性...     

透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B异构体表达及其整体甲基化的分析

目的检测透明细胞肾细胞癌组织中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)异构体表达及其整体甲基化的变化,探讨这些变化与透明细胞肾细胞癌的关系。方法选取15例透明细胞肾细胞癌及其癌旁组织,应用Real-time PCR技术检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3B六种主要异构体的mRNA表达,应用Western blot法检验DNMT3B4蛋白表达;应用联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)分析重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平。结果透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B4 mRNA和蛋白表达水平比癌旁组织高;重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平在透明细胞肾细胞癌组织中比癌旁组织低。结论 DNMT3B4表达增加可能与整体甲基化降低及透明细胞肾细胞癌的发生有密切关系。     

外泌体miRNA在心血管疾病中作用的研究进展

<正>心血管疾病有着高患病率和高死亡率,是对成年人特别是中老年人身体健康产生严重威胁的常见疾病。每年因心血管疾病死亡的人口占全球死亡总人数的30%以上,目前已成为临床重点关注研究的领域。有研究表明心血管疾病与微小RNA（microRNA,miRNA）的调节关系紧密。近年来更是有研究证实了miRNA作为外泌体细胞间信息传递过程中重要的信号分子,参与相关信号通路的调节,并涉及心血管疾病的生理病理机制[1,2]。?     

低氧预适应对小鼠海马组织细胞红蛋白表达的影响

目的探讨细胞红蛋白在低氧预适应小鼠海马中的作用。方法复制急性重复低氧模型,利用Real-time PCR法检测小鼠海马组织细胞红蛋白的变化。结果低实验组小鼠海马组织细胞红蛋白mRNA的表达虽然高于未经低氧的对照组但未达到统计学意义,低氧预适应组小鼠海马组织细胞红蛋白mRNA的表达显著高于对照组。结论小鼠急性重复缺氧后脑海马神经元细胞红蛋白mRNA表达增强,推测细胞红蛋白可能参与低氧预适应形成和脑保护。     

低氧预适应对小鼠大脑HIF-α表达的影响

目的 观察重复性低氧对小鼠大脑内HIF-α蛋白质表达的影响.方法 小鼠低氧0次(H0)、1 次(H1)、4 次(H4)后取海马组织,应用免疫组织化学技术,检测小鼠海马组织内HIF-α的蛋白表达变化.结果 实验发现HIF-1α在H0 、H1 、H4 组小鼠海马脑片中阳性表达,H4 组染色明显加深,在大脑皮层和海马锥体细胞层、分子细胞层、齿状回均有较高表达.结论 急性低氧预适应使小鼠大脑内HIF-α表达增加.