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目的:从大容量甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)人源噬菌体单链抗体(single chain variable fragments,scFv)库中筛选出特异的抗MTC单链抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:分别以甲状腺上皮细胞TEC细胞株和MTC细胞TT细胞株为抗原进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的富集循环,筛选出抗MTC抗体,将筛选出的阳性克隆感染E.coli HB2151;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导抗体可溶性表达,HiTrapTM Anti E-tag柱纯化表达抗体;SDS-PAGE和Western blot检测抗体表达和相对分子质量;ELISA检测可溶性scFv的特异性和免疫活性,分为TT细胞组、SW480细胞组、TEC细胞组和PBS空白对照组,分别检测各组在酶标仪A450 nm处的吸光度;四甲基偶氮唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分别检测TT细胞组、SW 480细胞组与不同浓度svFv反应并读取A490 nm处的吸光度,设置空白对照PBS组,分别计算细胞抑制率。结果:5轮筛选后,抗体得到了明显富集。随机挑取单个细菌克隆,phage ELISA 和scFv ELISA阳性率分别为65%和50%。SDS-PAGE、Western blot结果显示MTC特异性抗体分子量为28 kD左右。ELISA结果显示,TT细胞组的吸光度(0.41±0.12)较SW 480细胞组(0.20±0.03)、TEC细胞组(0.13±0.01)、PBS空白对照组(0.07±0.01)明显增加(P=0.000)。MTT法结果显示,TT细胞组和SW 480细胞组在scFv浓度为0.1、1、10 μmol/L时,2细胞株间抑制率有统计学意义,统计量分别是t=2.881,P=0.02;t=5.073,P=0.006;t=7.324,P=0.000,且在scFv浓度为10 μmol /L时,对TT细胞的抑制率最高(0.59±0.15)%。结论:利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性的抗MTC人源单链抗体。 相似文献
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目的探讨进行丙氨酸转移酶(ALT)检测对献血合格率的影响,分析开展ALT筛查对提高用血安全的意义。方法随机将2011年5387份血液标本作为观察组,随机抽2010年的4189份血液作为对照组,对照组未进行ALT初筛,观察组进行ALT初筛,比较两组血液废弃率以及第二次筛查的ALT不合格率。结果观察组血液报废率为3.1%(167/5387份),对照组为5.71%(239/4189份),观察组的血液报废率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组初筛后ALT不合格率为2.7%,经复检ALT不合格率为1.2%,对照组ALT复检不合格率为3.8%,观察组复检的ALT不合格率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在核酸检测等新技术广泛应用于血液筛查之前,对献血者献血前进行血液ALT初筛检测可有效降低ALT报废率,提高献血合格率,保障用血的安全性。 相似文献
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对于心理问题,有的人能够把心中的困惑化解掉,而有的人却难以排解,长期沉浸在痛苦和压抑之中[1].长期的心理问题抑制了人体机体的免疫力,进而产生了疾病[2].治疗期间的心理问题更加变化无常和复杂.给予适时的恰如其分的心理护理对治疗进程和疾病的恢复是至关重要的.2005年5月至2008年1月我院造血干细胞移植中心实施造血干细胞移植的肿瘤患者7例,根据不同的个体施行心理护理,疗效满意.报告如下. 相似文献
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目的 测定131I标记的抗甲状腺髓样癌(MTC)人源单链抗体(scFv)的放射化学纯度,并研究荷MTC细胞(TT cells)裸鼠131I-scFv体内分布和体外放射免疫(RII)显像特点。方法 氯胺T法对scFv进行131I标记,Sephadex G200纯化标记抗体,三氯醋酸沉淀法测定标记率,纸层析法测定标记抗体在1、6、12、24 h的放射化学纯度、室温稳定性和血清稳定性。构建荷TT细胞裸鼠模型,尾静脉注射131I-scFv,分析131I-scFv在裸鼠重要组织器官的分布情况,并于注射药物12、24、48、72 h行SPECT正位静态显像,观察肿瘤内放射性浓集情况,肿瘤组织显像清晰时行SPECT/CT融合图像。结果 标记抗体经纯化后,测得标记率为(78.60±0.08)%,放射化学纯度为(87.10±0.78)%,各个时间点的放射化学纯度均在90%以上。荷瘤裸鼠体内研究结果显示,131I-scFv的放射性瘤/血、瘤/肌肉比值随时间的增长逐渐增高,48 h达最高。RII显示,131I-scFv可选择性聚集于肿瘤组织,48 h时肿瘤显像与全身组织对比最清晰,此时融合图像可清晰显示肿瘤部位的放射性浓聚情况,体内分布和体外显像结果一致。结论 成功标记了抗MTC人源scFv,生物活性较高,荷瘤裸鼠肿瘤的RII较好。 相似文献
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摘要:1例3岁男性患儿,因“发作性呼吸困难1年”入院,行心脏移植术。临床药师全程参与术后患儿的药物治疗,根据病情变化,通过监测他克莫司血药谷浓度、调整免疫抑制药方案、使用抗菌药物,为患者制定精准个体化用药方案,避免药物相互作用,患者病情好转出院。临床药师运用治疗药物监测学,协助医生及时调整药物剂量,有利于提高临床药物治疗水平,促进合理用药,为此类疾病的治疗和药学服务积累经验。 相似文献