发酵乳制品中乳酸菌的流式检测方案探索与研究

目的 建立基于流式细胞术的发酵乳制品中乳酸菌快速计数方法, 实现发酵乳制品中乳酸菌的快速定量检测。方法 使用5(6)-羧基荧光素二乙酸酯（5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate,cFDA） 和碘化丙啶（Propidium iodid,PI）2种荧光染料对乳酸菌进行染色,经流式细胞仪检测乳酸菌的荧光信号,从而实现细菌定量计数。在分析过程中对染色剂浓度、荧光通道阈值进行优化,并将流式计数结果与现行国标方法进行对比研究。结果 在样品浓度为104 CFU/mL(g)时,通过0.05 μg/mL的PI和10 μmol/L的cFDA染色,在绿色荧光通道增益为100,红色荧光通道增益达到1000时,能够达到最佳的流式检测条件,且样品检测结果与现行国标检测方法存在显著的正相关关系（P<0.01）,2种方法测试结果相关系数值为0.949。结论 流式细胞术具有灵敏度高、检测时间短、稳定性高、重现性好等优点,对于货架期普遍较短,放行压力大的乳制品生产企业来说,能够缩短检测时间,实现产品快速放行上架。     

高通量二代测序基因条形码技术在动物源性制品物种鉴定中的应用

该研究利用二代测序和DNA条形码技术对生物制品中动物源性成分鉴定方法进行探索性研究。首先对常见的哺乳动物、禽类、鱼类物种以及多种混合样本进行了核酸提取,并利用PCR技术对其线粒体基因16S rRNA区域354 bp的检测位点进行扩增。使用Illumina Miseq二代测序技术获取所有序列信息,并与Gen Bank数据库比对分析样本中的物种组成。结果显示,混合样品中所有动物源性成分均得到正确鉴定;鹅和鸭核酸的最低检测下限为0.5ng/μL;市售商业化动物源性制品经检测发现2起标签不符问题。该检测方法在一个高通量测序和结果比对分析实验周期内,实现了混合DNA片段序列信息的一次性获取。检测结果准确,适用范围广,有望为动物制品标识符合性检查、打击走私等方面提供技术保障。     

食品和饲料中鹅源性成分微滴式数字PCR检测与定量分析

本研究利用微滴式数字PCR(droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)技术对食品和饲料中鹅源性成分进行检测与精确定量。选取鹅的单拷贝核基因作为靶基因,建立了鹅源性成分靶基因拷贝数与样品质量之间的线性关系;选取21种常见动物物种及鹅的9个品系对所设计的引物及探针的种间特异性和种内保守性进行了验证,并对该方法的检测下限(limit of detection,LOD)和定量检测下限(limit of quantification,LOQ)进行了验证,利用已知鹅源性成分含量的样品和市售商品对该方法的准确性和适用性分别进行了验证。结果表明,所设计的引物及探针具有良好的种间特异性和种内保守性,该定量检测方法的检测下限和定量检测下限分别为1 copy/μL和5 copies/μL,且该方法具有良好的准确性和适用性,可用于对食品和饲料中鹅源性成分进行检测和精确定量。