液相色谱-质谱法快速检测4 种乳源低聚糖

建立一种乳样经简单预处理后采用超高效液相色谱-串联质谱同时检测4 种重要的乳源低聚糖方法。牛乳及人乳经过脱脂、脱蛋白后经amide液相色谱柱用0.1%氨水-乙腈溶液梯度分离,采用质谱检测。2 种唾液酸乳糖标准品的标准曲线在0.78～50.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）,2 种岩藻糖乳糖标准品的标准曲线在1.56～100.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）。加标回收率在80.00%～100.00%之间,重复性、精密度实验所得相对标准偏差均小于5.00%。     

母乳和牛乳中乳脂肪球膜蛋白质的差异分析

为比较乳脂肪球膜（milk fat globule membrane,MFGM）蛋白在母乳和牛乳中的差异,采用有机试剂提取法,从母乳和牛乳中提取分离出MFGM蛋白,经皮尔斯TM去垢小柱去除十二烷基硫酸钠后,通过液相色谱-质谱联用技术检测分析,检测结果根据特异性肽段匹配数不小于1筛选后,在母乳和牛乳中分别检测到863 种和454 种蛋白,其中二者共有175 种,分别独有688 种和279 种。将母乳中差异表达的688 种蛋白质按PANTHER数据库进行蛋白质的Gene Ontology（GO）功能注释,这些蛋白主要是细胞部分、细胞器、细胞膜等组分,参与的生物途径有新陈代谢过程、生物调节、刺激性反应、免疫系统过程、再生作用等,具有催化、黏合、转运、酶调节等多种分子功能。另外,母乳中的这些差异蛋白参与氨酰tRNA生物合成、致病性大肠杆菌感染、脂肪酸代谢、丙酸代谢、甾体合成、酸降解等都是牛乳中的乳脂肪球膜蛋白不具有的功能。通过分析得出母乳和牛乳中的MFGM蛋白具有明显差异,虽然有部分组成和功能的重叠,但在丰度和代谢路径上,牛乳MFGM蛋白不能替代母乳MFGM蛋白。     

基于NanoLC-Orbitrap MS技术分析牛乳中的乳脂肪球膜蛋白质

运用纳升高效液相色谱与静电场轨道阱组合式高分辨质谱(Nano LC-Orbitrap MS)技术对牛乳中的乳脂肪球膜蛋白质进行定性、定量分析。采用超高速离心提取的方法,从牛乳中分离提取乳脂肪球膜蛋白,经超滤管辅助酶解法前处理,用Nano LC-Orbitrap MS技术分析酶解后的肽段,与数据库检索比对识别蛋白质,并利用PANTHER数据库对所识别的肽段匹配数≥2的蛋白质进行基因本体功能注释和分类。运用两个技术重复和3次连续进样,验证方法的重复性和精确度;从比对结果中提取部分离子流色谱图和二级质谱图,显示出质谱的高可靠性和灵敏度。采用此方法一次进样分析,可识别的蛋白质多达658种,选取识别出611种蛋白质的数据进行分析,具有可靠定量信息的蛋白593种,特异性肽段匹配数≥2的蛋白244种,对这244种蛋白进行GO注释,结果显示这些蛋白主要分布在细胞部分、细胞器、细胞膜和一些高分子复合物中,参与代谢过程、细胞过程、定位、生物调节和免疫系统过程等生物途径,具有很多的分子功能,如催化活性、粘合作用、转运活性、酶调节活性和结构分子活性等。此方法可为基于质谱技术的蛋白组学在乳脂肪球膜蛋白质的应用中提供理论指导。     

产抗菌肽肠球菌的筛选及其抗菌肽生物学性质

利用牛津杯琼脂扩散法从新生儿粪便中筛选到一株产广谱抗菌肽的乳酸菌菌株,经菌体形态观察、生理生化分析、全自动微生物基因指纹鉴定系统和16S r DNA序列分析确定该菌株为屎肠球菌（Enterococcus faecium）。经过氧化氢酶处理后,发酵上清液仍具有抑菌活性,而胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性基本消失,说明该抑菌物质为蛋白类似物,即抗菌肽。该菌株所产抗菌肽在p H2.0⁵.0范围内保持活性,45¹00℃处理1 h后抑菌活性基本不变。发酵液中的抗菌肽经液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）和数据库APD比对得出3条不同的抗菌肽氨基序列,具有重要的研究价值。