UPLC-MS/MS法测定乳及乳制品中氯霉素残留前处理方法的比较

通过比较3种不同的前处理方法,建立了超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中氯霉素的质量分数,以氯霉素-D5为同位素内标定量。测定氯霉素质量分数的方法。结果表明,对于液态乳制品,采用水∶甲醇的溶液提取氯霉素,乙酸锌沉淀蛋白,HLB固相萃取柱富集净化。该方法前处理简单快速,对环境污染小,且检出限(以信噪比S/N=3计)为0.02μg/kg,添加回收率为86.7%~90.7%,相对标准偏差(RSD)2.27%,适用于大量样品的集中测定。对于固态乳制品采用乙酸乙酯提取氯霉素,Silica固相萃取柱富集净化。该方法的检出限为0.1μg/kg,添加回收率为85.2%~90.2%,相对标准偏差(RSD)2.87%,稳定性高,适用于配方、工艺十分复杂的固态乳制品。     

气相色谱-质谱法检测牛初乳中β-雌二醇的研究

建立了气相色谱-质谱法检测牛初乳中β-雌二醇质量浓度的方法。牛初乳经过β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶水解后,经过乙腈超声提取、沉淀蛋白,正己烷去除脂肪,HLB固相萃取柱富集净化后,氮气流下吹干,N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生,N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺(TMCS)辅助催化,气相色谱-质谱(GC-MS)对衍生物进行检测分析。β-雌二醇质量浓度在5~200μg/L之间线性关系良好,相关系数(R2)大于0.999;加标回收率在85.13%~104.78%之间,相对标准偏差在4.74%~5.97%之间。该方法操作简便、灵敏,精密度好,适用于牛初乳中β-雌二醇的测定。     

环介导等温扩增技术快速检测肉中金黄色葡萄球菌

应用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术建立了对肉中金黄色葡萄球菌检测的方法。实验中,使用了最新的Bst 2.0 Warm Start DNA聚合酶完成LAMP扩增反应,并针对金黄色葡萄球菌所特有的保守性耐热核酸酶基因（nuc）设计得到了一套LAMP扩增引物。对LAMP法和PCR法的检测灵敏度进行了比较,同时对人工污染肉中的金黄色葡萄球菌进行检测。结果表明：所建立的LAMP法能够特异性的检测金黄色葡萄球菌,并且检测金黄色葡萄球菌纯菌的灵敏度为2.01×10~0CFU/m L,是普通PCR检测灵敏度的100倍。在检测肉中金黄色葡萄球菌时,检测限为2.01×10~1CFU/m L。因此,本实验所建立的LAMP法检测肉中金黄色葡萄球菌的方法,具有灵敏、快速以及简便等的优点,是一种具有很好的发展前景的检测手段。     

CRISPR/Cas-等温扩增技术在食源性病原菌检测中的研究进展

食源性病原菌引起的食品安全事件引起广泛关注,为保证食品安全,采取有效的检测手段至关重要。新兴的簇状规则间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）及其关联蛋白（CRISPR-associated protein,Cas）组成的CRISPR/Cas系统是广泛存在于细菌和古细菌中的一种获得性免疫系统,可高效、特异性识别并切割外源核酸,与传统技术相比在检测病原菌方面更为高效。本文基于CRISPR/Cas生物传感系统-等温扩增技术联用的相关研究进行综述,对CRISPR/Cas系统的分类、原理以及与等温扩增耦合后在食源性病原菌检测方面的研究进展进行概述,并对其在即时检测应用中的前景以及所面临的挑战进行深入探讨,以期为CRISPR/Cas生物传感系统的进一步发展提供参考。     

不同来源胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达

根据GenBank上报道的两歧双歧杆菌ATCC 29521的胆盐水解酶基因(BSH)序列和嗜酸乳杆菌NCFM的胆盐水解酶基因(BSHA和BSHB)序列,设计引物通过PCR扩增获得BSH基因,将其连接到表达载体pET28a(+),构建pETBSH表达质粒,经IPTG诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明在分子质量大小约40、43、45kD处有预期条带出现,初步表明蛋白表达成功。重组菌产生的胆盐水解酶水解甘氨胆酸钠产生的甘氨酸经茚三酮比色法分析,表明该重组的胆盐水解酶具有水解活性。     

婴儿肠道菌群中乳酸菌的分离鉴定及其多样性分析

结合传统培养方法与基于PacBio Sequel平台的单分子实时(Single-molecule real-time,SMRT)三代测序技术,对中国婴儿肠道菌群中的乳酸菌进行分离鉴定并分析其多样性,同时探究抗生素治疗对婴儿肠道乳酸菌多样性的影响。采用稀释涂布法培养分离粪便样品菌落,运用生理生化试验及16S rDNA序列比对鉴定菌株,并分析不同菌株间的系统发育关系。同时提取整体粪便样品的基因组DNA进行16S rDNA全长SMRT测序,利用QIIME、Mothur等生物信息学分析软件进行细菌群落结构和多样性分析。结果表明:中国婴儿肠道菌群中乳酸菌丰度及多样性普遍较低,传统培养方法分离出7种共32株乳酸菌,经鉴定为Lactobacillus rhamnosus、Enterococcus faecalis、L. gasseri、L. plantarum、L. casei、Pediococcus pentosaceus与Bifidobacterium longum;SMRT测序技术共获得11种乳酸菌,分别为L. rhamnosus、E. faecalis、L. gasseri、L. casei、P. pentosaceus、L. paracasei、L. salivarius、L. paraplantarum、L. porcinae、B. pseudocatenulatum、B. longum。其中,抗生素组仅分离检测到2种乳酸菌,分别为L. porcinae和E. faecalis。传统培养方法与SMRT测序技术对婴儿肠道菌群中乳酸菌多样性的分析存在差异,且抗生素的使用会降低婴儿肠道菌群中乳酸菌的多样性。     

后生元的功能及其应用

随着人们生活质量的提高,对疾病及健康的关注度也随之提高。人们不再将关注点放于治疗疾病的相关医疗器械与药物成分,而是逐渐对起着预防、改善或辅助性缓解作用的新兴物质、成分或加工产品进行着重了解。这类物质对机体的作用更加侧重于通过定期的外部摄入来维持生理功能的运转或或促进健康。可外部摄入且有益于机体的物质最基本的要求是食用安全,而无副作用、多种类、多元化将、高效方便将是人们未来关注的新标签。定期摄入具有安全认证的益生菌产品,被认为是改善人体健康状况以及缓解疾病的一种较为安全且普遍的方法,而益生菌存活率低,发挥作用要求较高,使得其在大规模制备、长时间运输储存并保证其作用特性上存在一定的困难。到目前为止,各种保证益生菌高活性的制备、储存方法也在被不断地研究。近年来,伴随人们对益生菌研究的深入,已发现由益生菌通过不同制备方法所得的后生元也可对机体产生积极影响,并具备益生菌产品所不具有的稳定且储运方便等特点,或将成为未来改善机体状况或增强机体功能的新方向。本文综述后生元对机体的各种功能,其相关产品在各领域的应用情况。     

光照调整对于牛乳中褪黑素质量浓度的影响及其检测

通过调整奶牛的光照周期使牛乳中富含褪黑素成分,并通过液相色谱技术对于富含褪黑素的原料乳进行检测,结果发现褪黑素质量浓度有显著提高。色谱条件:色谱柱Zorbax eclipse XDB C18柱;流动相为甲醇∶水=60∶40,流速为1 mL/min,荧光检测器Ex=286 nm,Em=345 nm。     

原料乳中大肠杆菌O157:H7的快速检测

建立了一种快速检测原料乳中大肠杆菌O157:H7的PCR技术.该方法利用过滤富集菌体后的PCR技术来检测原料乳中大肠杆菌O157:H7,先对人工污染大肠杆菌O157:H7的原料乳进行离心脱脂,然后添加EDTA-2Na获得澄清乳液,最后通过0.45 μm微膜过滤收集菌体,整个过程只需6 h左右即可完成.检测灵敏度高达10-mL-1.这种方法在传统检测方法的基础上做了有效改进,使得原料乳中的大肠杆菌O157:H7的检测能够快速、准确、灵敏的进行.     

新技术在原料乳与乳制品中致病菌检测方面的应用

介绍了ATP生物发光技术、环介导等温扩增(LAMP)技术、基因芯片技术、生物传感器技术和微流体芯片技术等一系列迄今为止最为新兴的技术,在原料乳与乳制品检测方面的应用情况。