马早期流产相关功能基因挖掘的研究

旨在探究与马早期流产相关的功能基因.在同一舍饲马群体中筛选配种后45 d能够检查到胚胎,但2～4个月后发生流产的母马10匹(流产组),以及能正常分娩的母马10匹(分娩组).采集马匹血液样本,提取基因组DNA.全基因组平均测序深度为10×,基因组覆盖度97％以上,每个样本大约测得4×106个SNP.对流产组和分娩组的全基...     

蒙古马免疫组织NF-κB信号通路相关基因的表达研究

为丰富蒙古马NF-κB信号通路的研究内容,为蒙古马机体固有免疫调控的研究奠定理论基础,本研究采用实时荧光定量PCR和Western Blot方法,分析蒙古马肝脏、脾脏、肺脏和血液组织中NF-κB信号通路上7个基因的表达情况.结果表明,7个基因在4个组织中均有表达,但存在差异.NF-κB p50、IL-1β和NFKBIA...     

蒙古马盲肠中纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶学特性分析

为研究蒙古马耐粗饲料的优良特点,试验以蒙古马盲肠内容物为研究对象,旨在筛选、分离出高效的蒙古马源纤维素分解菌株,并对分离菌株进行鉴定和酶学特性分析。采用羧甲基纤维素平板法和摇瓶发酵法分离菌株并鉴定菌株类型。最后,通过测定纤维素酶活力分析菌株在不同pH、温度、碳源和氮源条件下的酶学特性。研究从蒙古马盲肠内容物中分离筛选到具有较高降解纤维素能力的解淀粉芽孢杆菌H3(Bacillus amyloliquefaciens H3)。菌株H3分泌纤维素酶的最适p H为4.8,在p H 3.0～8.0范围内,其酶活力相对稳定;在温度为65℃,酶活力最高,当温度为40～50℃时,该酶活力维持在80%左右,稳定性强。此外,H3发酵所需的最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为2%的蛋白胨+酵母粉复合物(1:1),它具有相对较高的纤维素酶活力,有深入开发的潜力。     

患子宫内膜炎母驴与健康母驴的阴道菌群差异分析

为探究患子宫内膜炎母驴阴道病原,本试验从规模化养殖场采集5份患子宫内膜炎母驴病料作为患病组,以6份健康母驴样本作为健康组,采用16S rDNA扩增子测序技术对2个组阴道分泌物样本中的菌群进行比较分析。结果显示,患病组母驴阴道菌群的多样性和丰富度均高于健康组;与健康组相比,患病组母驴阴道变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著增加,而梭杆菌门(Fusobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和未分类菌门(Unidentified bacteria)显著降低(P<0.05);在属的分类水平上,患病组母驴阴道中链球菌属(Streptococcus)丰度显著高于健康组母驴(P<0.05),链球菌属可能是母驴子宫内膜炎的主要致病菌;在主成分分析上,患病组样本间的微生物群落差异较大,而健康组样品间的微生物组成相似;功能预测上,患病组阴道内微生物的免疫系统(Immune system)和传染性疾病(Infectious diseases)2个功能的相对丰度显著高于健康组,说明阴道内含有大量相关功能的微生物发挥着作用。本试验为母驴子宫内膜炎的后续预防和治疗...     

表达木质素降解酶的基因工程产朊假丝酵母菌部分生物学特性研究

木质素是农作物秸秆饲用化利用的主要限制因素,现仅有少数微生物产生木质素降解酶,且产量少、酶活低,不适合工业化生产,酶蛋白的高效异源表达是提高木质素降解酶产量的有效途径。工程菌ZHMX4和ZHQX1是分别从黄孢原毛平革菌和云芝栓孔菌中扩增出木质素过氧化物酶基因（lip）和漆酶基因（lac）,利用同源整合重组技术构建所得的工程菌。对前期构建的表达木质素降解酶工程菌ZHMX4和ZHQX1进行了部分生物学特性研究,包括木质素降解酶适宜反应条件、木质素降解酶基因拷贝数和工程菌降解天然木质素能力的测定及工程菌营养需要分析,了解2株工程菌特性的同时为后续研究工作奠定基础。结果显示：工程菌ZHMX4和ZHQX1产木质素降解酶最适反应温度和pH分别为30℃、3.0和30℃、4.5;2株工程菌各2 m L（添加量为109cfu/g）混合对100 g玉米秸秆进行发酵时,木质素的降解率达到50.12%;根据Biolog YT微孔板试验结果,可优化2株工程菌的培养基,在培养基中添加一些营养物质,可促进工程菌的生长。     

内蒙古呼伦贝尔地区本土牛牛肉黄脂现象的相关基因和代谢组学研究

[目的]初步探索内蒙古呼伦贝尔地区本土牛牛肉黄脂现象可能的调控机制。[方法]从呼伦贝尔市选取72头本土牛,每头牛均采集皮下脂肪及肝脏组织样本。采用5分制主观评分方法,对皮下脂肪样本进行颜色评分。以肝脏组织为试验材料,利用五引物扩增受阻突变体系（penta-primer amplification refractory mutation system,PARMS）分析参与β-胡萝卜素代谢过程的相关通路中关键基因BCO2 SNPW80X、BCMO1 SNP4、RDHE2 SNP2、ALDH8A1 SNP16和PPARCG1A SNP12的基因型及基因频率分布情况。运用液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术对脂肪样本进行非靶向代谢组学检测,挖掘不同颜色脂肪样本的代谢差异物,并将差异代谢物进行代谢通路富集分析。[结果]72份皮下脂肪组织以白色为主,黄色脂肪（评分3分及以上）比例占到30.55%,BCO2、BCMO1、RDHE2和PPARCG1A等基因在不同样本中存在SNP差异,但这些差异与脂肪颜色无显著（P>0.05）相关性。黄色脂肪样本与白色脂肪样本相比,共鉴定到235个差异代谢物,这些...     

饲喂方式对德州驴生长性能、营养物质消化率和盲肠微生物多样性的影响

本试验旨在研究饲喂方式对德州驴生长性能、营养物质消化率和盲肠微生物多样性的影响。选择体重[(215±10)kg]相近、2周岁左右的健康德州公驴15头,随机分为C1组(饲喂方式为先粗后精)、C2组(饲喂方式为先精后粗)、C3组[饲喂方式为全混合日粮(TMR)],每组5头,预试期7 d,正试期75 d。结果显示:1)C2组平均日增重极显著高于C1和C3组(P≤0.01),C1组干物质和酸性洗涤纤维消化率以C1组最高,C3组次之,C2组最低,C1组与C2组间存在显著差异(P≤0.05)。2)饲喂方式对德州驴盲肠微生物组成有一定影响。在门水平上,各组盲肠微生物均以厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为主(二者占比>75%),其次为螺旋体菌门(Spirochaetes)、变形菌门(Proteobacteria)和纤维杆菌门(Fibrobacteres),且C2组厚壁菌门相对丰度高于C1组和C3组;在属水平上,将401个属中相对丰度低于1%的属聚为其他(占比>75%)后,各组均以其他为优势菌属;随后,C1组以螺旋体科未定义属(unidenti⁃fied⁃Spirochaetaceae)和厌氧孤菌属(Anaerovirbrio)为主,C2组以厌氧孤菌属、链球菌属(Strepto⁃coccus)和螺旋体科未定义属为主,C3组则以乳酸杆菌属(Lactobacillus)和螺旋体科未定义属为主。3)通过UPGMAA聚类树、主成分分析和物种差异性分析发现,3组德州驴盲肠微生物组成不同,且C2组与其他2组差别较大,C1组和C3组可聚为一类。综上可知,饲喂方式可极显著影响德州驴的平均日增重,显著影响干物质和酸性洗涤纤维消化率,并可改变盲肠微生物组成。     

瘤胃枯草芽胞杆菌的分离鉴定及其木聚糖酶基因的克隆和在乳酸球菌中表达的研究

通过形态学和16S rDNA序列分析方法,从绵羊瘤胃内容物中分离得到的细菌中鉴定出枯草芽胞杆菌。根据GenBank中已知Bacillus subtilis木聚糖酶基因序列设计带有酶切位点的引物,克隆到2条不同的木聚糖基因序列。通过酶切和连接等相关分子方法成功构建出以pMG36e为载体的表达木聚糖酶的重组质粒,转化到乳酸球菌粒MG1363后,均能高效表达,酶活性分别为28.29 U/mL和7.11 U/mL,比原枯草芽胞杆菌酶活2.17 U/mL高出13.04倍和3.28倍。     

蒙古马和纯血马免疫相关基因差异表达分析

为了评价蒙古马(Equus mongolian horse)和纯血马(E.thoroughbred)免疫生理机能在适应特殊生存环境和人工选择压力过程中相关基因的表达多样性。本研究对健康成年蒙古马(n=3)和纯血马(n=3)的颈静脉血液进行RNA-Seq和品种间表达谱比较分析。对2岁左右健康蒙古马(n=3)和纯血马(n=3)采集肝脏、脾脏、肺脏和血液样品,利用qRT-PCR方法,分析NF-κB信号通路7个基因在两个品种中的表达情况。利用Western blot方法,分析蒙古马和纯血马肺脏中核因子κB亚基p65 (RELA proto-oncogene NF-kB subunit, NF-κB p65)蛋白和白细胞介素1β (interleukin 1 beta, IL-1β)蛋白的表达情况。结果表明,RNA-Seq共获得19.69～23.95 Gb的高质量数据和1 199个差异表达基因,许多差异表达基因直接参与机体的免疫过程。NF-κB信号通路7个基因在蒙古马和纯血马4个免疫组织中均表达,基因表达的品种间差异存在组织多样性;7个基因在蒙古马肺脏的表达量均高于纯血马,除肿瘤坏死因子(tum...     

乳酸乳球菌食品级双筛选标记的分泌型表达载体的构建

纤维素酶在畜牧业、饲料工业、生物技术和生物能源利用方面均有广泛应用。纤维素酶基因工程作为研究的重点,可以提高酶产量和稳定性,具有广阔的应用前景。通过利用基因工程技术改造pMG36e载体,成功构建出具有双筛选标记的外分泌表达纤维素酶的食品级重组质粒,完成载体构建;然后将该质粒转化到粪肠球菌19855株并实现基因表达,经测定,分泌的纤维素酶活力为0.92 U/mL。该研究结果为后续食品级工程菌的进一步研制奠定了基础。