HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性测定系统的研究进展

NS3/4A丝氨酸蛋白酶是理想的抗HCV靶位之一.缺乏有效的细胞培养系统和小动物模型是抗HCV药物筛选和评价的瓶颈,基于酶建立的测定系统常被用作筛选和鉴定抗HCV药物.关于NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性的测定系统已经有很多报道,本文从细胞内测定和体外测定系统两方面综述如下.     

肾综合征出血热内分泌组织中的病毒抗原、病变及其关系

作者应用免疫细胞化学法研究了HFRS尸检内分泌及其有关组织中病毒抗原的分布,病毒抗原阳性细胞与病变的关系,病变的类型及病毒感染对胰腺内胰岛素表达的影响,所用的一抗有抗肾综合征出血热(HFRS)病毒糖蛋白(G_2),核蛋白(NP)及血凝素(HA)抗原的单克隆抗体(15种)和多克隆抗体(PAb)以及抗胰岛素(INS)单克隆抗体。结果显示,内分泌组织中有两种染色形态的病毒抗原,一种是胞浆弥漫染色的抗原,为G_2,NP或HA阳性,阳性细胞弥漫分布,另一种是以病毒包涵体(IB)形式出现的颗粒性抗原,MAbs染色多为实性,PAb染色多为空泡状。在9例胰腺组织中,有4例几乎在所有腺上皮细胞和少数胰岛细胞均为IB阳性,但PAb染色可在胰岛细胞中显示出空泡状IB。在其它内分泌组织中,IB只在少数细胞中出现。抗原阳性细胞很少出现坏死,但在脑垂体及肾上腺灶性或片状凝固性坏死区域也有弥漫性抗原阳性及IB存在。胰腺组织的胰岛素染色显示,除1例胰岛INS强阳性,其余8例均有明显的INS染色减弱及阳性细胞减少的表现。结果提示,内分泌组织中有两种病变,即以IB为特征的病毒直接感染引起的细胞病变,是病毒的弱致病变作用,该病变可能对细胞的内分泌功能产生影响;另一种病变是组织的灶性或大片性同步性凝固性坏死,是继发于病毒感染后的出血和休克,该病变会     

乳铁蛋白(Lf)抗病毒感染研究进展

乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白,在动物和人体内分布较广.它不仅能促进对铁的吸收、调节胚胎发育和细胞繁殖,而且在免疫调节和防御细菌、真菌和病毒中发挥重要作用.现就Lf抗病毒的研究作一综述.     

抗汉坦病毒单克隆抗体F（ab‘）2的制备及其纯度和活性鉴定

利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１０００００。两种Ｆ（ａｂ′）２片段均具有良好的血凝抑制活性、病毒中和活性及对汉坦病毒感染乳鼠的保护作用     

杂交瘤细胞系复苏方法的探讨

淋巴细胞杂交瘤技术开展以来,人们获得越来越多的分泌不同特性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,一般冻存于液氮罐中,当在复苏时,常常遭遇失败,直接影响后续工作。究其原因,如冻存细胞数量少,生长状态不良、细胞污染或补充液氮不及时等;此外,复苏时培养基条件的改变(换用另一批号小牛血清)及复苏方法不得当等也是原因。本     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳属保护作用的研究

本文进一步观察了自制的24株抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染HFRS病毒新生乳鼠的保护作用。将HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染昆明种小鼠的新生乳鼠后24h,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发     

单克隆抗体对HFRS病毒50K结构蛋白的分析

采用18株抗HFRS病毒McAb,以Western-blotting技术对纯化的该病毒50K结构蛋白进行了分析。结果有7株McAb可与该蛋白反应,这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,并提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50K结构蛋白的特性及结构均较复杂,值得进一步研究。     

McAb亲和层析纯化HFRS病毒50K结构蛋白及其鉴定

先用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取出粗制病毒抗原。再选择一株的抗HFRS病毒的McAb(5H5)与CNBr活化Sepharose 4B相偶联,制成免疫吸附柱, 并以上述粗制病毒抗原通过免疫吸附柱。用3M KCNS洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个明显的蛋白洗脱峰,用ELISA从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴度。而用从正常乳鼠脑提取的对照抗原通过该免疫吸附柱,同样洗脱,结果洗脱物中未捡出抗原活     

McAb接种孕鼠体内对HFRS病毒感染子代乳鼠的被动保护作用

肾综合征出血热(HFRS)迄今尚无特异性有效的治疗制剂。本文在用小白鼠新生乳鼠人工感染HFRS病毒试验证明抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染动物有保护作用的基础上,在小白鼠孕鼠(BALB/c纯系小鼠,本室自行繁殖)产前3d和5d,皮下接种抗HFRS病毒血凝素McAbs(3D8、3G1、3G3及8F8等量混合制剂1ml,待其子鼠产后第3天,腹腔接种100LD_(50)HFRS陈株病毒悬液,观察两周。同法接种抗HF-     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.