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目的：探究FLT3急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia, AML）抑制剂ASP2215联合组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase inhibitor,HDAC）抑制剂SAHA,对伴FLT3-ITD突变的细胞株MV4-11的协同作用及其作用机制。方法：用不同浓度的ASP2215、SAHA单药或两药联合处理白血病细胞株MV4-11,观察细胞形态变化,采用CCK-8试剂盒检测其细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹检测FLT3及下游信号分子STAT5的磷酸化,分析凋亡调控蛋白Mcl-1、Bcl-xL、Bcl-2、Bax和caspase-9、caspase-3的蛋白含量。结果：①相较于FLT3野生型细胞株THP-1,ASP2215能够特异性地抑制FLT3-ITD突变AML细胞株MV4-11细胞的增殖。②ASP2215和SAHA单药处理均能抑制MV4-11细胞的活性,这种抑制作用呈浓度和时间依赖性,且两药联合使用时能够协同抑制MV4-11细胞株的活性,不同药物浓度联合的联合指数（combination index,CI）值皆小于1。③ASP2215和SAHA呈浓度和时间依赖性诱导MV4-11细胞凋亡,两者联合能够进一步增加MV4-11细胞凋亡。MV4-11细胞凋亡的过程中,伴caspase-3和caspase-9蛋白剪切活化,且活化程度随细胞凋亡增加而上升。相较于单药作用,两药联合能够引起更多的caspase-3和caspase-9剪切活化。形态学上,细胞凋亡和坏死改变随着药物浓度增加依次增多,且两药物联合能够引起细胞更明显的凋亡和坏死改变。④FLT3抑制剂ASP2215能够降低FLT3受体及下游分子STAT5的磷酸化水平,SAHA对FLT3及下游STAT5分子磷酸化也有轻度抑制作用。ASP2215和SAHA都能引起Mcl-1和Bcl-xL抗凋亡蛋白水平的降低,轻度下调Bcl-2蛋白和轻度上调Bax蛋白表达水平。两药联合相较于单药能够进一步下调Mcl-1、Bcl-xL的蛋白表达水平和Bcl-2/Bax蛋白比例。结论：ASP2215联合SAHA能够协同抑制伴FLT3-ITD突变MV4-11细胞株增殖,促进细胞凋亡,其机制涉及两药对FLT3-STAT5通路不同程度抑制作用,以及对凋亡相关蛋白Mcl-1、Bcl-xL及Bcl-2/Bax蛋白比例的调控。 相似文献
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目的提取新生小鼠的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并进行培养和鉴定。方法应用酶消化和免疫磁珠分选方法分离并纯化C57B/L6新生小鼠AECⅡ。根据AECⅡ特异的细胞形态,利用透射电镜进行鉴定。正置荧光显微镜观察AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C前体(proSP-C)及表面活性蛋白-B (SP-B)的表达。免疫印记技术检测新生小鼠AECⅡ中特异性肺泡表面活性蛋白-A (SP-A)及proSP-C的表达。结果每只新生小鼠可获得(2±0.5)×105AECⅡ,纯度>90%。电镜下可见丰富的AECⅡ及其特异结构板层小体。正置免疫荧光显微镜观测AECⅡ中proSP-C和SP-B蛋白的表达,免疫印迹结果显示细胞内SP-A和proSP-C蛋白表达呈阳性。结论利用酶消化和免疫磁珠分选的方法可成功分离出高产量、高纯度的新生小鼠AECⅡ。 相似文献
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