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网上实验室克隆与鉴定食管癌相关基因ECRG—4 总被引:3,自引:0,他引:3
利用生物信息学,探索网上克隆基因与鉴定基因的新方法。以因特网为平台,数据库为试验材料,各种软件为工具组成网上实验室,是人类基因组计划带来的实验技术革命。利用网上实验室以食管癌相关基因E-CRG-4的97bpEST为基础,成功克隆并鉴定了该基因。结果显示ECRG-4近似cDNA全长序列为772bp,其中含有一447bp的完整阅读框,编码148个氨基酸。氨基酸序列相似性分配表明ECRG-4与细胞膜上的免疫球蛋白超家族具有31%同源性。该基因定位于染色体2q141-14.3。组织分布表明ECRG-4须正常食管、膀胱组织中表达明显高于相应的癌组织。采用辐射杂交细胞系GeneBridge4RH嵌板作染色体定位进行初步验证,所得结果与网上克隆完全一致。研究提示,利用网上实验室克隆鉴定基因,是一种简便、精确的好方法。ECRG-4可能是一个在细胞癌变过程中具有非常重要意义的基因。 相似文献
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建立了一种从胎盘合胞体滋养层微绒毛膜蛋白中简单迅速两步纯化 EGFR 蛋 白的方法.用 Triton X-100 抽提微绒毛膜蛋白,使之两次通过 FPLC(Fast Pro-tein Liquid Chromatography)系统的 Superose 6 色谱柱纯化.SDS 胶电泳后,得到单一的 170000分子量 EGFR 蛋白带.纯化后的受体在 EGF,MnCl2 和 (γ-32P)ATP 条件下,仍然保留胞内所具有的对 EGF 敏感的使受体自身磷酸化的蛋白激酶活性. 相似文献
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PCR直接测序方法及其在肿瘤研究中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
PCR直接测序技术是PCR扩增与核酸测序技术相结合的一种方法.根据此技术的原理,建立了一种以PCR扩增引物为测序引物,α-35S dATP直接掺入,Taq DNA聚合酶直接测序PCR扩增产物的方法.实验表明:该方法简便、快速、稳定.用此方法对人食管癌组织中的抗癌基因p53进行了突变测序分析,发现食管癌组织中p53存在点突变,插入、丢失移码突变.并用此方法对人和恒河猴的p53内含子序列进行了测定,发现猴第5内含子为81个核苷酸,第8内含子为92个核苷酸. 相似文献
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