以gfp为报告基因的肺炎链球菌启动子诱捕文库的构建与分析

首先构建一个以gfp(green fluorescence protein)为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP,将肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200bp～800 bp)克隆到该质粒gfp基因上游的多克隆位点,得到约58000个含有肺炎链球茵基因组DNA随机酶切片段的重组子,提取质粒即为质粒库,该库大约覆盖肺炎链球菌基因组全长的5倍,插入率达到90%以上,且有较强的随机性,质量较高.将该质粒库转化入肺炎链球菌TIGR4菌株,带有随机片段的报告质粒通过同源重组的方式将gfp基因融合于细菌染色体上该随机片段之后,利用质粒的抗生素抗性基因筛选出重组菌株,从而构建出相应的菌株库,共获得包含约500000个肺炎链球菌转化子的菌株库,经体内、外实验表明,其包含插入了S.pn体内、外表达基因片段的细菌,可以报告特定条件下的基因表达,并可通过流式细胞仪识别、分选.该文库的构建为进一步利用差异荧光诱导技术筛选肺炎链球菌体内诱导基因奠定了基础.     

滇藏常绿杜鹃亚属的修订

常绿杜鹃亚属Subgenus Hymenanthes是由K.Koch（1872）根据Blume（1826）建立的Genus Hymenanthes改级组合而成。但长期以来人们一直沿用了Maximowicz（1870）所建立的、后由Koehne（1893）修订过的Subgenus Eurhododendron这一亚属名称,直到最近D.F.Chamberlain（1978,1979,1982）对该亚属的名称才作了正式订正。     

一种新型T细胞免疫原的原核表达及对口蹄疫疫苗的免疫增强作用

主要探讨了T细胞免疫原TI对口蹄疫疫苗的免疫增强作用。设计并原核表达产生了一种包含口蹄疫病毒VP1,VP4,3A和3D蛋白上多个T细胞表位与两个通用T细胞表位的T细胞免疫原,命名为TI;同时表达了O和Asia 1两个型口蹄疫病毒 VP1 蛋白的串联编码基因,表达产物命名为OA-VP1。将上述T细胞免疫原分别与OA-VP1和口蹄疫灭活疫苗按不同剂量组合免疫小鼠,于免疫后不同时间测定各组小鼠的体液与细胞免疫应答情况。采用微量中和试验检测小鼠O型和Asia1型中和抗体,采用流式细胞检测技术和测定γ-干扰素的水平来分析不同免疫组小鼠细胞免疫的水平。结果显示,与灭活疫苗或OA-VP1单独免疫组相比,添加TI抗原后灭活疫苗 (P＜0.01) 和OA-VP1免疫组(P＜0.05)小鼠均能产生高水平的特异性中和抗体;且CD4+ T细胞数量显著增多,IFN-γ产生水平显著升高 (P＜0.01)。说明TI抗原具有很好的诱导特异性体液与细胞免疫应答的作用,是一种很好的免疫增效剂,可作为口蹄疫蛋白亚单位疫苗和灭活疫苗中的一种有效成分,以提高疫苗的免疫效果。     

冻融交替对长白山不同林型土壤两种温室气体排放的影响

以长白山5种林型土壤(硬阔叶林、红松阔叶林、次生白桦林、长白松林和蒙古栎林)为对象,利用原位培养连续取样法研究了冻融过程中5种林型土壤CO2和N2O排放特征及相关机理.结果 表明:冻融期5种林型土壤是CO2和N2O的源.次生白桦林和红松阔叶林土壤CO2和N2O的平均通量显著高于其他3种林型.除硬阔叶林外,各林型土壤CO...     

李白盾蚧转录组分析及SSR位点开发

李白盾蚧Pseudaulacaspis prunicola (Maskell)寄主范围广泛,是一种重要的入侵害虫。本研究利用高通量测序平台（Illumina NovaSeq 6000）对李白盾蚧进行转录组测序、de novo从头组装及功能注释,在此基础上筛选其微卫星（SSR）位点,并挖掘微卫星引物。研究共获得李白盾蚧转录组60 296条转录本,24 967条单基因（unigenes）序列。通过GO数据库注释,将所有unigenes的功能分为生物学进程、细胞组分和分子功能三大类41个亚类功能区。KOG数据库注释结果显示,5 085条unigenes归到25个基因家族,注释到一般功能预测的数目最多。KEGG代谢通路富集分析显示6 668条unigenes注释到280个代谢通路,其中注释到内质网中蛋白质加工的数目最多。利用MISA软件共搜索到微卫星位点18 193个,分布在9 043条unigenes中,占总unigenes数量的36.22%,平均每2.29 kb出现一个SSR位点。其中主要重复类型为单核苷酸重复,占SSR位点总数的72.03%,其次为三核苷酸重复（15.90%）和二核苷酸重复（8.48%）。单核苷酸重复主要为A/T（71.16%）,二核苷酸重复主要为AG/CT（5.20%）。基于Primer Primer 3软件设计出12 538对李白盾蚧SSR引物,从中随机挑选50对引物进行PCR验证,共29对引物可以稳定扩增出目的片段。本研究成功组装了李白盾蚧转录组数据,并基于转录组数据成功筛选出其微卫星位点,为未来该虫的种群遗传学以及入侵生物学研究提供了数据支撑。     

一株高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建

利用DNA体外重组技术,将大肠杆菌质粒载体pUM3上的抗砷基因簇片段亚克隆到含有强启动子（tac启动子）并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上,删除调节基因片段,构建了含有强启动子、可在tra基因诱动下转移的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性喜温硫杆菌Acidithiobacillus caldus中,构建了冶金工程菌Acidithiobacillus caldus (pSDRA4),接合转移频率为（1.444±0.797）×10-4。表明在大肠杆菌和喜温硫杆菌之间成功地建立了一个遗传转移系统。经检测,重组质粒在喜温硫杆菌中具有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定（重组质粒保留76% 以上）。经抗砷性能检测,与野生菌相比,构建的喜温硫杆菌工程菌抗砷能力明显提高,从10mmol/L提高到45mmol/L。     

抗砷载体的构建及在喜温硫杆菌中的接合转移

利用DNA体外重组技术,将质粒载体pUM3上的抗砷基因片段亚克隆到含有强启动子(tae启动子)并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上,成功构建了含有强启动子的抗砷质粒pSDRA3,以及删除调节基因片段的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性的喜温硫杆菌中,首次成功地建立了喜温硫杆菌的遗传转移系统,构建了冶金工程菌T.caldus(pSDRA3)和T．caldus(pSDRA4)。与野生菌相比,重组菌抗砷性能明显提高。     

老年患者ERCP 的安全性和有效性研究

目的:研究ERCP在高年龄患者中应用的有效性和安全性。方法:回顾性分析2010年6月-2011年7月在本医院进行ER-CP诊治的患者253例。按年龄分组,其≤65岁的患者(低年组)115例,65岁-80岁的患者(中高年组)79例,≥80岁的患者(高年组)59例。记录患者ASA分级、实验室指标、ERCP操作以及并发症、住院天数情况,对结果进行统计分析。结果:253例患者进行了ERCP操作,失败8例。胆总管结石患者178例,恶性肿瘤患者48例。ERCP操作成功率为96.8%(95.6%vs 97.4%vs98.3%),取石成功率98.3%(97.3%vs 98.2%vs100%),结石取尽率96.6%(96%vs 96.5%vs 97.8%),高年组患者ASA分级比中高年和低年组高,差异有统计学意义。术前实验指标差异无统计学意义。186例接受了乳头括约肌切开(EST),(71.3%vs 73.4%vs78.0%),33例患者采用了预切开术(16.5%%vs 6.3%vs15.3%),27例患者术中出现困难插管(13.0%vs 7.59%vs10.2%),ERCP诊断胆总管结石70.4%(65.2%vs 72.2%vs78.0%),以上差异均无统计学意义,恶性肿瘤19.0%,多见于高年组患者(12.2%vs 21.5%vs28.8%),低年组和高年组差异有统计学意义,十二指肠乳头周围憩室39.9%(28.7%vs 48.1%vs50.8%),低年组分别与中高和高年组差异有统计学意义。三组患者行ERCP后病情缓解天数分别为1.61±0.83,1.39±0.72,1.49±0.70。各种并发症共43例(17.0%),低年组25例(21.7%),中高年组8例(10.1%),高年组10例(16.9%),无严重并发症及死亡发生。差异均无统计学意义。结论:1.高年组患者ASA分级较高,但ERCP操作成功率、并发症发生率及治疗后病情缓解天数与其他组患者无差别,ERCP在老年患者中的应用是安全而有效的。2.中高年组及高年组十二指肠乳头周围憩室比低年组多见,但对ERCP操作成功率和并发症发生率无影响。     

高产耐盐牧草——高冰草

高产耐盐牧草高冰草卢晓峰赵清刘辉贺福林景亚平丁松平刘春兰高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇｌｕｍ）,禾本科多年生草本植物,原产澳大利亚,８０年代初引入我国,目前东北、西北有一定的栽培面积,在生产上发挥了作用。高冰草不论是青草还是干草,含有特殊的清香...     

中国丹蝽属记述(半翅目,蝽科)

描述1新种,宽丹蝽Amyotea lata sp.nov.,采自云南、西藏。给出丹蝽属分种检索表,并提供了中国已知种的成虫背腹面整体照片12幅以及生殖器解剖图14幅。模式标本除注明者外均保存在南开大学昆虫学研究所标本馆内。