QF-PCR筛查男性不育患者Y染色体无精子症因子微缺失

为评估定量荧光PCR(Quantitative fluorescent polymerase chain reaction, QF-PCR)技术在快速筛查无精子症因子(Azoospermia factor, AZF)微缺失中的应用, 文章对1218例非梗阻性无精子症、少精子症的男性不育患者, 采用多重QF-PCR结合毛细管电泳技术, 检测Y染色体长臂AZF区9个序列标签位点(Sequence tagged site, STS)以及性染色体短臂的AMEL(Amelogenin)和SRY(Sex-determining region of Y chromosome)位点, 辅以常规染色体G显带方法进行核型分析。结果显示, 1218例患者中105例可见AZF区微缺失(8.62%), 其中AZFc区缺失(67.62%)最常见, 其次为AZFb,c区缺失(20.95%); AZFb区缺失(7.62%)和AZFa区缺失(3.81%)则较少见; 另有5例患者为AZFa,b,c区缺失合并AMEL-Y缺失, 提示可能缺少Y染色体, 经核型分析验证为46,XX(性反转)。105例AZF区微缺失患者的染色体核型分析显示染色体异常16例, 其中“Yqh-”12例。根据AMEL-X/AMEL-Y比值, 可见1218例患者中86例可能存在性染色体异常, 经核型分析验证, 68例为性染色体非整倍体。多重QF-PCR技术, 一个反应即能检测样本的多个位点, 并可提示性染色体是否存在异常, 有助于男性不育患者尽早明确病因, 也为后续的检查和治疗提供依据。     

WNK1基因不同转录本在小鼠肾脏中的表达及意义

目的研究WNK1基因长短两个转录本在小鼠肾脏组织中的表达分布特征,为进一步研究它们的生物学功能提供实验数据.方法 RT-PCR扩增两个转录本的特异性片段,Northern印迹杂交证实片段特异性后,将片段克隆入pGEM-T载体中,体外转录同位素标记的正义和反义RNA探针,在小鼠肾脏组织石蜡切片上进行原位杂交检测.结果 WNK1基因长转录本微弱广泛地表达在小鼠肾脏组织上,短转录本特异地表达在小鼠肾脏皮质部的远曲小管上.结论在肾脏,WNK1基因的短转录本是功能性转录本,其编码的蛋白质在生物学功能上可能与其它激酶不同.     

人类免疫球蛋白超家族一个新成员：a—1B糖蛋白前体基因的克隆和分析

应用RACE方法,从人肝Marathon cDNA中克隆一1694bp的cDNA,其中开放阅读框架在43-1530bp,编码495个氨基酸,1～17氨基酸为信号肽,有4个IGc2结构域,与从人血浆分离的a-1B糖蛋白高度同源,是一个尚未克隆的a-1B糖蛋白前体基因,属于免疫球蛋白超家族的一个新成员,可能在细胞识别和细胞行为的调节方面起作用。     

人类发育与遗传学整合课程教学体会

人类发育与遗传学整合课程体系的建立是课程改革的重要部分。通过整合教学内容, 稳定教学队伍、开展教材建设、实施PBL(Problem-based learning)教学模式等进一步完善了整合课程体系, 确立了整合+PBL教学模式, 并通过教学实践证明切实可行, 在提高教学效果、培养学生能力上发挥一定的作用。     

多个顺式作用元件调节血管紧张素原基因表达

血管紧张素原是最强的血管活性物质——血管紧张素Ⅱ的唯一前体,在不同的生理和病理条件下,其水平各异．为了研究血管紧张素原基因表达的调控,将人血管紧张素原基因５′端侧翼序列１．２ｋｂ同氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）基因编码序列连接,构成表达载体,并且在此基础上构建５′端系列缺失的突变表达载体,用这些表达载体转染ＨｅｐＧ２和ＣＯＳ－７,确定了正负调控元件;同时应用ＤＮＡ－蛋白质凝胶泳动检测技术,发现核蛋白质与该顺式元件的结合,从而证明多个顺式作用元件调节血管紧张素原基因的表达．     

SH2D4A互作蛋白的筛选及初步鉴定

SH2D4A是SH2蛋白家族成员之一,可能参与酪氨酸蛋白激酶相关受体介导的信号转导,调节细胞的生长、增殖和分化,进而影响人类疾病的发生。为明确SH2D4A在细胞信号转导通路中的作用机制,本研究运用酵母双杂交技术筛选SH2D4A相互作用蛋白,并利用GST pull-down实验进行了初步鉴定。首先成功构建了酵母诱饵蛋白重组表达载体pGBKT7-SH2D4A;利用该重组体对人肾脏cDNA文库进行逐级筛选,共得到46个阳性克隆;经目的基因分离,DNA测序及BLAST软件序列比对分析发现5种可能的SH2D4A互作蛋白（AZGP1、DAD1、HSD17B10、KAT5和PKM2）;NetPhos 2.0 Server软件预测结果显示除HSD17B10外其他4种蛋白均含有磷酸化酪氨酸;进一步以KAT5和HSD17B10作为代表进行GST pull-down,证实两者均可直接结合SH2D4A。以上结果为深入研究SH2D4A的功能奠定了基础。     

人肝刺激因子基因5'-侧翼序列克隆和结构分析

为探讨人肝刺激因子(human hepatic stimulator substance,hHSS)基因表达调控的分子机制,分离人了hHSS基因组DNA,克隆其5'-侧翼序列4 890 bp,与GenBank比对后,将hHSS基因定位于人16号染色体.通过逆转录PCR(RT-PCR)和5'RACE确定hHSS基因转录起始位点,为进一步研究hHSS基因启动子活性及转录调控特点提供了必要的实验依据.     

人肝刺激因子基因5′-侧翼序列克隆和结构分析

为探讨人肝刺激因子(human hepatic stimulator substance,hHSS)基因表达调控的分子机制,分离人了hHSS基因组DNA,克隆其5′-侧翼序列4890bp,与GenBank比对后,将hHSS基因定位于人16号染色体。通过逆转录PCR(RT-PCR)和5′RACE确定hHSS基因转录起始位点,为进一步研究hHSS基因启动子活性及转录调控特点提供了必要的实验依据。