血小板生成素基因在体内的表达及对造血祖细胞增殖活性的影响

探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素（ＴＰＯ）基因在小鼠体内的表达规律,以及对造血祖细胞增殖活性的影响．基因在导入后的２４小时内就开始转录,先于血小板、血液ＴＰＯ浓度、及造血祖细胞的变化．所表达的ＴＰＯ在血液中的聚积可持续４周以上．巨核祖细胞,粒系祖细胞都出现２周左右的增殖增长,长于血小板计数的升高,但红系祖细胞的变化不明显．这些结果显示,基因治疗过程中血小板计数等变化源于ＴＰＯ的表达及刺激,而在此期间一些调控机制被激活,对血小板形成的平衡发挥作用．     

人血小板生成素cDNA转导促进小鼠生长与胰岛素样生长因子相关

人血小板生成素 ( TPO)基因转导能刺激小鼠生长 .将编码人 TPO的真核表达质粒pc DNA3 h TPO、野生型 pc DNA3 或生理盐水注射小鼠后肢肌肉 ,称量小鼠的体重、器官重 .用半定量 ELISA检测 TPO转导小鼠血清中胰岛素样生长因子 ( IGF) - 、 和血小板源生长因子( PDGF)水平 .结果发现 ,TPO基因转导能促进小鼠的生长 .这种促生长作用与年龄和性别有关 ,但与动物的种系无关 .8～ 1 2周龄雌鼠在基因转导后 1周生长开始加快 .在第 1、2、3和 4周的升高幅度分别为 4.3%、5.3%、4.1 %和 4.38% ( P分别 <0 .0 0 5、0 .0 0 2、0 .0 1和 0 .0 1 ) .小于 4周龄的幼鼠、大于 1 6周的老龄鼠 ,以及雄性鼠在基因转导后体重无明显改变 .半定量 ELISA分析发现 ,体重增加的成年雌性鼠 ,其血清中 IGFs和 PDGF均升高 .基因转导鼠血液中葡萄糖、甘油三酯及碱性磷酸酶水平升高 .结果表明 ,一些生长因子 ,特别是 IGF- ,介导着 TPO对转基因动物的生长刺激作用 .     

乳酸菌素Gassericin T基因的合成及其在大肠杆菌中的融合表达

目的:在大肠杆菌系统中表达有抗菌活性的乳酸菌素Gassericin T。方法:根据乳酸菌素Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的结构基因gatA编码的氨基酸的密码子转换成大肠杆菌偏爱的形式;用人工合成的寡核苷酸片段,通过重叠PCR法扩增得到gatA片段(gat基因);将合成的gat基因插入pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-1-gat融合表达载体,转化大肠杆菌DH5α株,IPTG诱导表达,经超声裂解后获得包涵体蛋白,经溶解、变性、复性处理后获得GST-Gassericin T融合蛋白;用琼脂扩散法测定其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、李斯特菌、枯草杆菌等的抗菌活性。结果与结论:采用pGEX-4T-1融合表达系统在大肠杆菌中表达了有活性的Gassericin T,融合蛋白以包涵体形式存在。复性的融合蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑制作用,对李斯特菌的抑制作用不明显。     

白细胞介素-18基因肌肉注射产生明显抗肿瘤作用(英文)

 为了探讨人白细胞介素 (h IL ) - 1 8基因转导的抗肿瘤作用 ,构建了 h IL- 1 8c DNA真核表达质粒载体 pc DNA3/h IL- 1 8.将 pc DNA3/h IL- 1 8经脂质体包裹 ,按照 1 0 0μg/只的剂量注射入雄性Balb/c小鼠后肢肌肉 ,在设定时间处死小鼠取注射部位肉提取总 RNA,应用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及免疫组化法检测了 h IL- 1 8m RNA及其蛋白质在小鼠肌肉中不同时间点的表达水平 .随后 30只雄性 Balb/c小鼠于基因注射后第 7d腹部皮下 (i.d.)或腹腔内 (i.p.)接种 1×1 0 5个同系小鼠 S- 1 80肉瘤细胞 .观察了 S- 1 80肿瘤细胞在腹腔及皮下的生长情况、小鼠体重、肿瘤重量及存活时间 .结果发现 ,pc DNA3/h IL- 1 8注射后 2 d能检测到 h IL- 1 8m RNA表达 ,第 7d表达量较高 ,第 2 8d仍有 h IL- 1 8m RNA表达 .免疫组化染色显示了注射部位散在有 h IL- 1 8蛋白质颗粒 .h IL- 1 8基因注射组小鼠体重、肿瘤重量均比对照组轻 (P值分别小于 0 .0 0 5、0 .0 5) ,存活时间比对照组延长 .结果显示 ,真核表达系统 pc DNA3/h IL - 1 8经脂质体包裹肌注后能有效表达 ,具有明显的抑制肿瘤生长作用 .     

人IL-18 cDNA克隆及其真核表达质粒的构建

用ＲＴ－ＰＣＲ技术从健康人外周血单核细胞的总ＲＮＡ中扩增出编码白细胞介素１８的全长ｃＤＮＡ,并将此基因定向克隆入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３中,通过对转化子的筛选得到了带有ＩＬ－１８插入片段的阳性克隆,经酶切分析及核苷酸测序表明,克隆到的基因与文献报道的完全一致。把重组质粒ｐｃＤＮＡ３／ＩＬ－１８分别转染人肝癌细胞ＨｅｐＧ２和鼠肉瘤细胞Ｓ１８０,在ｍＲＮＡ水平检测到ＩＬ－１８的表达,但ＩＬ－１８ 的表达未诱导肿瘤细胞产生ＩＦＮ－γ。     

人血小板生成素cDNA转导抑制小鼠移植肉瘤(S180)的生长

以小鼠肉瘤S180为模型 ,研究人血小板生成素 (TPO)在肿瘤基因治疗方面的价值 .在小鼠接种瘤细胞前 2周 ,或在接种肿瘤细胞同时 ,给小鼠注射 10 0 μgTPO表达质粒 (pcDNA3 hTPO) ,在 2周和 4周时肿瘤平均重量明显小于单纯质粒 (pcDNA3)注射和生理盐水对照组 (提前转导组P <0 0 5 ,同时转导组P >0 0 5 ) .当肿瘤移植量为 1× 10 6时 ,2周时肿瘤的重量依次分别为 1 75 6g、3 6 37g和 3 92 6g ;当肿瘤移植量为 1× 10 5,2周时肿瘤的重量依次分别为 0 5 76g、5 6 1g和 5 84g .在转导基因 2周时 ,移植 1× 10 5肿瘤细胞组有 4 10受试鼠完全未形成肿瘤或肿瘤的生长被中止在早期阶段 .流式细胞分析发现 ,TPO转导后 ,肉瘤内浸润淋巴细胞从以CD8+为主转变为以CD4 +或CD4 +CD8+为主 .不过 ,TPO转导对瘤细胞在体外的增殖无明显改变 .TPO转导鼠的血清对S180细胞在体外的生长速度也无影响 .推测T淋巴细胞参与了TPO基因转导所产生的抗肿瘤作用     

肌球蛋白单克隆抗体标记大鼠心肌坏死的研究

Monoclonal antibody (MAb) attained from hybridoma 1A5 was against human cardiac myosin heavy chains (CMHC) and didn't react with smooth muscle. It was labeled with Na 125 I and injected to the rats suffered from acute myocardial necrosis, which were treated by isoproylarterenol. After injection, the rats were studied from the 4 th to the 48 th hours by relative radioactivity in blood, thyroid gland, stomach, liver, lung, muscle and heart, respectively. The results indicated that 125 I CMHC MAb could specifically reach the target necrotic organ in the 4 th hours (2 03±0 60 ) and remained up to the 48 th hours (2 55±0 49) or longer, at which the 8 th was higher (4 89±0 44). Meanwhile 125 I CMHC MAb showed much higher affinity to necrotic cardiac tissue than the normal ( P <0 001). The same results were should in the blood from 4 th (4 94±0 45) to 48 th (2 70±0 12). Thus 125 I CMHC MAb can be considered as an effective tool for image diagnosis of acute myocardial necrosis.