基于16S rDNA基因的谷斑皮蠹PCR检测技术

【目的】谷斑皮蠹是一种重要的检疫性害虫,在新疆周边多个国家分布,口岸检疫人员多次从进境货物中截获谷斑皮蠹,该虫对新疆的农业生产极具威胁。【方法】以谷斑皮蠹的16S rDNA基因为靶序列,用昆虫通用引物对4种供试皮蠹进行PCR扩增,将扩增产物进行克隆和测序,用生物软件设计检测谷斑皮蠹的特异性引物与探针。【结果】设计的特异性引物(TG-SNP-F/TG-SNP-R)及所建立的常规PCR方法能有效检测出谷斑皮蠹,其扩增产物的片段大小为250 bp,灵敏度为3 ng·μL~(-1)。设计的特异性引物(TG-F/TG-R)和探针(TG-probe),以及所建立的实时荧光PCR方法,对谷斑皮蠹的检测特异性强,灵敏度达0.8 fg·μL~(-1)。【结论】建立的常规PCR方法和实时荧光PCR检测方法能够对谷斑皮蠹进行准确鉴定,为口岸检疫人员检测进境货物中携带的谷斑皮蠹提供技术支持。     

PML coiled-coil结构域与RAN结合蛋白9相互作用的验证

目的验证前髓细胞性白血病的卷曲螺旋结构域（PML—C）和RAN结合蛋白9（RANBP9）之间的相互作用。方法构建分别表达诱饵蛋白PML—C和靶蛋白RANBP9的载体pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9,然后转人酵母AH109,培养3～5d后对其是否有胞内相互作用进行检测。将目的片断PML-C和RANBP9再次构建于真核生物表达载体pCMV—HA和pCMV—myc里,然后共转染人胚肾293细胞里（HEK293）,最后对其是否有体外相互作用通过免疫共沉淀和免疫印迹进行分析。结果在共转化了质粒pGBKT7-PML—C和pACT2-RANBP9的AH109酵母平板里观察到蓝色菌落生长。用抗HA多克隆抗体对共转染过重组质粒的HEK293细胞的蛋白提取物进行免疫共沉淀,再用抗myc单克隆抗体作为一抗进行免疫印迹,最终检测出融合蛋白myc—RANBP9条带。结论酵母双杂交实验验证了PML—C和RANBP9之间存在胞内相互作用,同时免疫共沉淀实验也从体外验证了它们之间的相互作用。     

昆明小鼠体内发育早期胚胎葡萄糖代谢关键酶转录产物的分析

首次报道了昆明小鼠体内发育的早期胚胎1-细胞至桑椹期阶段葡萄糖代谢的3种关键酶-6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）、6-磷酸果糖激酶（PFK）和磷酸葡萄糖变位酶（PGM）的基因转录情况,其分别体现了磷酸戊糖、糖酵解、糖原的合成和分解等途径,根据G6PDH、PFK、PGM的cDNA序列分别设计和合成3套共6对内、外引物,采用巢式RT-PCR方法对其进行检测。结果表明：早期胚胎1-8细胞阶段均有G6PDH基因的转录,叠椹期胚胎不存在该基因的转录,说明早期胚胎1-8细胞阶段可能存在磷酸戊糖,而桑椹期则不存在;1-细胞至桑椹期均存在PFK基因的转录,说明该阶段的胚胎可能存在糖酵解代谢途径;1-细胞至桑椹期均不存在PGM基因的转录,说明该阶段的胚胎可能不存在糖原的合成与分解代谢途径。     

汉阳陵文物表面硫酸盐形成原因微生物学证据

用仅含硫源的无机盐培养基对采自汉阳陵13号和15号遗址坑文物表面的土样进行细菌富集筛选实验,并对分离的菌株进行生理生化特性研究、16SrDNA序列分析及硫代谢能力测试。分离得到5株细菌:TD1、TD2、TD3、TD15及PL13。其中TD1属于Alcaligenes,TD3属于Bacillus;硫代谢能力测试结果显示TD2、TD15和PL13代谢产生硫酸盐的速率远远小于TD3和TD1,TD3氧化硫源生成硫酸盐的速率是TD1的1.4倍。实验证实这些菌株均能氧化S、S2O32-和S2-生成硫酸盐从而获得能量,这表明微生物氧化土壤中硫化物是汉阳陵文物表面硫酸盐增加的原因,从而为汉阳陵文物表面硫酸盐的形成原因提供了微生物学依据。     

新疆蟠桃叶附生酵母种群结构分析

通过Illumina MiSeq平台, 对石河子143团两个蟠桃园所采集的叶片样本附生酵母菌26S rDNA D1/D2区进行高通量测序, 并分析了其物种的组成、Alpha多样性以及菌种群落结构。结果显示,两个桃园中共检测到1470个OTU (Operational Taxonomic Units, 操作分类单元), 桃园1中含有个1217个OTU, 桃园2中含有609个OTU, 其中有356个为共有OTU。共鉴定出酵母菌2门22属, 属于担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota), 两个桃园共有的酵母属有线黑粉酵母属(Filobasidium), 接合酵母属(Zygosaccharomyces), 红酵母属(Rhodotorula), 隐球酵母属(Cryptococcus), Papiliotrema, 毕赤酵母属(Pichia), 假丝酵母属(Candida), Kwoniella, Cystobasidium, 两个桃园优势属均为线黑粉酵母属。研究结果表明石河子地区蟠桃叶表面附生酵母菌资源丰富, 值得进一步开发与利用。     

猪微注射基因胚胎的自体移植

冲取７头超排或自然发情配种的湖北白猪后备母猪１-４细胞期胚胎８６枚,显微注射ＯＭＴ／ＰＧＨ基因后,移植回原供体母猪的输卵管内。其中５头受孕,４头维持到分娩,产仔１１头,产仔率１２。８％（１１／８６）;经分子杂交检测,３头阳性,基因整合率２７。３％（３／１１）。转基因效率３。５％（３／８６）。     

DHPLC系统工作原理及其应用

变性高效液相色谱(DHPLC)是一种高通量筛选DNA序列变异的新技术,从该仪器设备的组成、工作原理、基本操作方法、主要技术特点等作一综述,并对其在基因组领域的应用如SNP分析、双链DNA片段分析、微卫星分析、mRNA定量分析、引物纯度检测等方面及在医学、遗传学方面的应用作了较详细的综述。     

酵母双杂交技术筛选并回转验证在胞内与PML-C结构域相互作用的蛋白

目的 利用酵母双杂交技术在活细胞内筛选并回转验证与PML-C结构域相互作用的蛋白质.方法 通过诱饵质粒pGBKT7-PML-C,利用酵母双杂交系统从白血病细胞cDNA文库中筛选与PML-C结构域相互作用的蛋白质.结果 利用酵母双杂交技术筛选到43个能与PML-C结构域相互作用的克隆;经进一步的归类与酵母回转试验得到9个阳性克隆.结论 在细胞内PML-C结构域能与多种蛋白质有相互作用.中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）介导的急性早幼粒细胞白血病的发生可能与这些相互作用所致的生物学功能改变有关.     

性能测定规模对父系猪短期选择效果的影响

利用Monte Carlo模拟,研究了群体大小、公母比例和每窝测定猪头数对父系猪的近交系数、选择反应及其变异系数的影响。设定基础群母猪规模大小为100头到500头共5个规模,公母猪比例为1：10和1：20,每窝测定猪头数为2头和4头,公母猪各半。选择的性状为一般父系猪的选择性状,即断奶后生长速度和达100kg体重时的活体背膘厚,利用多性状BLUP估计性状的育种值,选择指数中后一性状的经济加权系数是前一个的2．5倍,选择共进行了5个世代。结果表明,随着选择群母猪头数的增加,第五世代累积选择反应提高,近交系数上升速度变慢,第五世代累积选择反应的变异系数下降。随每窝测定仔猪头数的增加和公母比例的升高,累积选择反应加快,近交系数上升速度提高,第五世代累积选择反应的变异系数上升。保持公母猪比例不变和每窝测定仔猪头数不变,基础群母猪头数从100头增加到300头,累积选择反应有显著增加,近交系数上升速度显著减慢。母猪头数300头和400头以上的相比,第五世代的累积选择反应增加有限,近交系数下降速度减低。综合评价,对于父系猪的短期选育来说,基础群需要400头母猪以上,每窝测定4头仔猪,公母比例以1：20较好。     

湖南省草莓灰霉病的发生与防治

为了解湖南省保护地草莓灰霉病的发生与防治情况,2013年2~4月对位于湖南省湘南的郴州、衡阳,湘东的长沙、株洲、湘潭,湘中的邵阳,湘北的岳阳、湘西的怀化等地区的保护地灰霉病的发生和防治情况进行了调查。结果表明:1各调查地区草莓灰霉病普遍发生,但发生严重程度存在差别,其中湘中邵阳市大兴村的病果率和病情指数最高达到46.67%和6.34,湘南衡阳师古村病果率次之,但并不严重,其他地区病果率和病情指数均呈正相关;2连作棚年限越长,病害发生越严重;轮作棚草莓灰霉病的发生相对较轻,病果率介于9%~14%之间,而且病害发生也不严重;3不同草莓品种抗病能力不同,中章姬品种的草莓病果率和病情指数较低,其次为法兰地、红颜品种的草莓和丰香品种的草莓病果率和病情指数相当,甜查理的病果率和病情指数最高,发病最严重;4定植时期早晚对草莓灰霉病的发生有影响,其中9月上中旬定植草莓灰霉病病果率和病情指数均较高;9月下旬至10月上旬定植病害的发生相对较轻;10月中旬及其以后定植不仅抗寒效果差,而且产果慢,经济效益差;5不同大棚类型也影响草莓灰霉病发生的轻重,其中全封闭立柱拱棚的病果率和病情指数最高为38%和5.87,简易连栋拱棚次之,拱形单栋式拱棚和无立柱半封闭拱棚相当,日光智能温室大棚发生最轻;6当前,湖南省防治草莓灰霉病使用最多的药剂是腐霉利,多菌灵次之,其他农药依据所占调查比例的高低依次为甲基托布津、嘧菌环胺、咯菌腈、异菌脲、多抗霉素、甲基嘧菌。首次对湖南省保护地草莓灰霉病发生情况的调查,其结果将为进一步开展湖南省保护地草莓灰霉病的系统研究和防控奠定基础。