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采用高密度发酵法发酵重组人γ干扰素产生菌SWINF/DH5α并成功地获得高表达、高产量的菌体,表达的γ干扰素蛋白占菌体总蛋白的60%以上,20L发酵液可收获2kg(湿重)菌体。纯化过程中采用尿素抽提、稀释、复性、浓缩后通过SephacrylS200柱的纯化方法,简化了纯化步骤,缩短周期,提高了蛋白回收率。纯化中未采用单抗亲和层析技术,使产品更为安全可靠。最终产品经SDSPAGE检测纯度达100%,核酸含量和热原均合格,A280/A260>15,比活性达1×107IU/mg,总回收率达40%。这说明整个工艺适宜大规模生产的需要,具有实际应用价值。 相似文献
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目的:鉴定疾病蛋白对深入理解致心律失常性右心室心肌病(ARVC)致病机制至关重要。可以采用计算生物学的方法,在ARVC疾病相关网络中挖掘新的潜在的致病蛋白。方法:本文整合HPRD和BioGRID的蛋白质互作数据,获得了较为全面且真实可靠的蛋白质互作数据;通过结合文本挖掘和统计学检验筛选出ARVC种子蛋白,应用最近邻居扩增的方法,构建ARVC蛋白质互作网络(PPIN),并采用PRINCESS法则对网络中每对互作蛋白加权;最后,基于ARVC关联得分策略对网络中的每个蛋白质打分并排秩。结果:分析发现排秩前50的候选蛋白大都与ARVC关系密切,如PRKCA,CDH1,SMAD4,SMAD2,CDH5,CTNNA1,DSC1等在调节心肌收缩、细胞程序性死亡、心脏的发育过程及维持桥粒的完整性方面起重要作用。结论:我们提出的方法为鉴定与ARVC致病机制相关的新致病蛋白提供了有效的途径。 相似文献
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以分离提取的HeLa细胞总RNA为模板,通过RT-PCR反应扩增得到了1017bp的人可溶性白细胞介素6受体(sIL-6R)cDNA片段,将扩增片段克隆到pUC19质粒中进行序列测定。结果证明该片的序列与文献报道的sIL-6RcDNA的序列完全一致,将sIL-6RcDNA与链霉素信号肽melCl的编码序列融合后得到的融合基因mel/sIL-6R克隆到链霉菌质粒pLJ459中,构建成重组表达质粒pL 相似文献
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采用高密度发酵法发酵重组人γ-干扰素产生菌SW-INF/DH5α并成功地获得高表达、高产量的菌体,表达的γ-干扰素蛋白占菌体总蛋白的60%以上,20L发酵液可收获2kg(湿重)菌体。纯化过程中采用尿素抽提、稀释、复性、浓缩后通过Sephacryl S-200柱的纯化方法。简化了纯化步骤,缩短周期,提高了蛋白回收率。纯化中来采用单抗亲和层析技术,使产品更为安全可靠。最终产品经SDS-PAGE检测纯度达100%,核酸含量和热原均合格,A280/A260>1.5.比活性达1×107IU/mg,总回收率达40%。这说明整个工艺适宜大规模生产的需要,具有实际应用价值。 相似文献
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