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两相分配法制备玉米根质膜及其纯度鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
用Dextran T500,PEG3350两相体系制备玉米根质膜,首先在高盐浓度下选用五种不同的聚合物浓度,研究了玉米根系膜在两相体系中的分配情况,在此基础上研究了NaCl浓度对玉米根质膜的纯度及得率的影响。结果表明,制备了玉米根质膜选用6.2%聚合物浓度,7.5mmol/L NaCl的两相体系比较合适。 相似文献
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玉米根ABA结合蛋白的亚细胞定位及动力学性质 总被引:9,自引:0,他引:9
以玉米(Zea maysL.)根或胚芽鞘为材料,经匀浆、分级离心得到胞质部分和膜部分(微粒体),进一步用6.2% (W/W ) Dextran T500 和PEG 3350 两相系统制备质膜,用1% 和8% (W /W) Dextran T70 梯度离心制备液泡膜. 电镜鉴定及多种标志酶检测表明,制备获得了高纯度正向型质膜和富含液泡膜的组分,其它内膜的污染很少. 用微量放射配体结合(MRLB)实验证明,玉米根微粒体的ABA专一性结合位点主要分布在液泡膜和质膜上,这两种膜组分与ABA 的特异结合活性分别为2485.4 fm ol/m g protein 和1257.3 fm ol/m g pro-tein,玉米根段胞质部分结合活性最低(差一个数量级).质膜上ABA-BP与ABA 的结合平衡解离常数(KD)为1.57 nm ol/L. 相似文献
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以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合(MRLB)实验表明玉米根微粒体膜上存在着ABA结合位点,ABA与ABA结合蛋白(ABA-BP)结合的最适pH为6.5,结合反应对温度(0℃和25℃)不太敏感,ABA与ABA-BP的结合反应是一个动态平衡过程,5min即可达最大结合(Bmax)的50%,30min达到最大结合,1h内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与ABA的结合不仅要求其自身具有特定构象而且需要有一定的膜脂环境,DTT处理实验结果显示ABA-BP中可能存在着二硫键。逆境处理可以提高玉米根微粒体膜对ABA的结合活性,盐胁迫、渗透胁迫、干旱胁迫和热冲激处理分别使结合活性上升34.9%、17.8%、23.1%和13.3%。 相似文献
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水通道或水通道蛋白是水分运动的主要通道.以RD28 cDNA和RD28抗体为探针证明了蚕豆(Vicia fabaL.)保卫细胞中存在水通道蛋白,并以气孔运动为指标,结合抗体和抑制剂处理证明水通道蛋白是水分运动的主要通道.研究表明编码质膜水通道蛋白的RD28转录体在叶片保卫细胞、叶肉细胞和维管束中高表达,尤以保卫细胞中最多;荧光免疫染色和Confocal显微镜观察表明,RD28抗体反应主要位于保卫细胞质膜.进一步采用RD28抗体和水通道蛋白抑制剂--HgCl2 (25μmol/L)处理可抑制壳梭孢素(FC)、光照诱导的气孔开放和原生质体体积膨胀以及ABA诱导的气孔关闭,但这种抑制作用可以被水通道抑制剂的逆转剂β-巯基乙醇(ME)逆转.表明蚕豆保卫细胞中存在水通道蛋白并参与蚕豆保卫细胞的运动过程. 相似文献
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脱落酸(ABA)受体的研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
植物激素脱落酸(ABA)在植物对逆境适应及种子发育过程中具有重要的生理功能。尽管ABA作用的分子机制还不清楚,ABA受体还未得到鉴定,但近年来对ABA结合蛋白的研究取得了可喜的进展,已在多种植物中证明存在与ABA有高亲和力的结合蛋白。ABA的识别到底发生在胞外还是胞内,近几年随着微注射技术的应用,也得到不少实验证据。ABA信号的转导途径,特别是位于下游区域参与信号传递的物质的研究取得重大进展,其中以ABA调节气孔保卫细胞开关的信号传递成为研究这一领域的模式体系。 相似文献
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玉米根微粒体ABA结合蛋白的性质及逆境胁迫的影响 总被引:11,自引:1,他引:11
以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合(MRLB)实验表明玉米根微粒体膜上存在着ABA结合位点,ABA与ABA结合蛋白(ABA-BP)结合的最适pH为6.5,结合反应对温度(0℃和25℃)不太敏感,ABA与ABA-BP的结合反应是一个动态平衡过程,5min即可达最大结合(Bmax)的50%,30min达到最大结合,1h内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与A 相似文献
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两相分配法制备玉米根质膜及其纯度鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
用DextranT500,PEG3350两相体系制备玉米根质膜.首先在高盐浓度(22mmol/LNaCl)下选用五种不同的聚合物浓度(5.8%、6.0%、6.2%、6.3%、6.4%,W/W),研究了玉米根质膜在两相体系中的分配情况,在此基础上进一步研究了Na-Cl浓度(2、4、5、11、22mmol/L)对玉米根质膜的纯度及得率的影响.结果表明,制备玉米根质膜选用6.2%(W/W)聚合物浓度,7.5mmol/LNaCl的两相体系比较合适.标志酶鉴定及低pH值磷钨酸染色电镜检测均表明获得了高纯度密实的正向型的质膜囊泡,质膜标志酶VO3-4-ATPase的活性潜势达88.9%. 相似文献
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水通道蛋白是对水专一的通道蛋白,普遍存在于动、植物及微生物中。研究表明高等植物的质膜和液泡膜上存在着丰富的水通道蛋白,其种类繁多,分布广泛,并具有一定的组织特异性。植物水通道蛋白的活性受到严格的调控,其调节方式主要有两种,分别为基因水平的表达调控和翻译后的修饰作用。 相似文献