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PCR,技术的应用,极大方便了对已知序列基因某一片段的克隆,但在实际操作中某些容易忽视的因素有可能导致实验失败,以下将我们在这方面工作中的几点体会总结如下以供借鉴。1.引物设计。在引物5'端设计酶切位点序列时一般要加保护碱基,如BamHI识别序列为5'-GGATCC,应设计成5'-CGGGATCC,这样才能保证下一步酶切反应的正常进行,因为5'端裸露的位点往往不能为限制酶识别,具体何种位点加什么保护碱基可参阅NewEnglandBiolabs96/97Catalog或其它有关材料。2.片段处理。PCR扩增片段最好用酚:氯仿抽提以除尽Taq酶,单纯… 相似文献
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新型的DNA序列测定策略:PCR产物直接测序 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA序列的测定在现代分子生物学中的应用越来越广泛,传统的模板制备方法是将待测序列的DNA片段插入质粒或病毒载体中,然后让其在宿主细菌细胞中增殖.尽管这套方法已被简化和标准化,但由于其涉及到活细胞的保存和使用,不可避免地会带来诸如载体和宿主细胞基因发生突变等不利影响. 相似文献
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目的:探讨血清人成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)、肾上腺髓质素前体中段肽(MR-proADM)、炎性因子与脓毒症患者预后的关系。方法:选取2015年9月至2018年9月我院收治的脓毒症患者160例(脓毒症组),按病情严重程度分为轻度脓毒症组(A组)56例、严重脓毒症组(B组)53例,脓毒性休克组(C组)51例,另选取同期50例健康体检者作为健康对照组。检测各组血清FGF-21、MR-proADM和炎性因子[(白细胞(WBC),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-10(IL-10)]水平,记录脓毒症患者序贯性器官功能衰竭评分(SOFA)和急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分及28 d预后。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析FGF-21、MR-proADM、炎性因子单独及联合评估脓毒症预后的价值。采用Spearman相关分析FGF-21、MR-proADM和炎性因子与APACHEⅡ评分、SOFA评分的相关性。结果:脓毒症组血清FGF-21、MR-proADM和炎性因子WBC、IL-6、TNF-α、IL-10水平均明显高于健康对照组(均P0.05),且随着脓毒症病情的加重,患者血清FGF-21、MR-proADM和炎性因子水平逐渐升高。脓毒症患者中28d死亡43例(26.88%),其中A组8例(14.29%)、B组12例(22.64%)、C组23例(45.10%)。ROC曲线分析显示,联合检测评估脓毒症患者病死率的曲线下面积(AUC)、敏感度及特异度均高于单一检测。脓毒症患者血清FGF-21、MR-proADM、WBC、IL-6、TNF-α与APACHEⅡ评分及SOFA评分均呈正相关性(P0.05),此外,IL-10与SOFA评分呈正相关性(P0.05),与APACHEⅡ评分无相关性(P0.05)。结论:脓毒症患者血清FGF-21、MR-proADM水平升高,检测FGF-21、MR-proADM和炎性因子有助于评估脓毒症患者的病情及预后。 相似文献
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乙型肝炎病毒(HBV)在其繁殖过程中要经过一个RNA中间体的逆转录复制,此过程中所用的RNA酶和逆转录酶本身不具有校错功能,所以HBV极易发生基因的变异。病毒基因的变异可导致其生物学特征的改变,生物学特征的改变又可引起病毒的感染性和致病性的变化,从而给患者的诊断、临床症状、预后和防治以及流行病学调查等带来许多问题,这促使国内外学者纷纷着力从HBV变异的角度探讨引起这些问题的原因。国内外学者应用多种方法对HBV变异进行检测,PCR技术的应用使 相似文献
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新型的NDA序列测定策略:PCR产物直接测序 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA序列的测定在现代分子生物学中的应用越来越广泛 ,传统的模板制备方法是将待测序列的DNA片段插入质粒或病毒载体中 ,然后让其在宿主细菌细胞中增殖。尽管这套方法已被简化和标准化 ,但由于其涉及到活细胞的保存和使用 ,不可避免地会带来诸如载体和宿主细胞基因发生突变等不利影响。而用PCR技术直接从基因组或克隆片段制备测序模板 ,可以完全避免细菌培养、模板提取等重复性操作 ,也克服了以上弊端 ;由于PCR技术快速、简便 ,在检测人类遗传病的基因突变时 ,需要比较患者和正常人中的突变分布情况 ,应用PCR直接测序技术就能… 相似文献
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结合激光雷达分析上海地区一次连续浮尘天气过程 总被引:4,自引:0,他引:4
通过分析2010年3月至20日至3月22日上海地区一次典型的连续浮尘天气过程,利用激光雷达数据资料反演得到的气溶胶消光系数图和垂直廓线图,结合地面气象数据和气溶胶观测资料以及卫星遥感资料,初步得出了此次连续浮尘天气形成的原因。外源性输入和垂直风场分布是导致此次浮尘天气发生的重要原因,大气层结变化决定着浮尘天气发生的强度,当存在接地逆温时,浮尘天气维持,而太阳辐射强度变化决定着边界层高度的变化。第一次浮尘过程以大颗粒污染为主,且在消光作用中散射性气溶胶的贡献大于吸收性气溶胶,而第二次回流浮尘过程则PM2.5比重上升,吸收性气溶胶对消光系数的贡献与散射性气溶胶大体相当。 相似文献
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目前 ,DNA测序的核心仪器是使用荧光染料标记的、具有CCD光学系统的DNA测序仪 ,其工作原理主要包括 :用不同的荧光染料确定A、G、C和T这 4种碱基的延伸反应 ,通过激光的激发 ,每种染料可以发射出不同的电信号 ,测序仪收集这些光波信号后 ,通过计算机数据分析 ,可得到相应的碱基序列。利用这种方法 ,所有 4种染料可在同一凝胶泳道中检测和辨别 ,消除了因泳道之间迁移率的差异所引起的误差 ,增加了测序的精确度 ;同时 ,可以增加在同一块凝胶上所能分析的模板DNA数量。毛细管电泳技术的应用可使测序样品的加样自动化 ,且无须用… 相似文献
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