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大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活性表达及在体外酰胺化修饰中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
将大鼠脑cDNA库来源的PAM基因片段,经克隆重组,构建成真核表达质粒pSV—PAM,并转染CH0细胞,获得在cHO中稳定表达活性型口α-酰胺化酶的细胞株DGAE。表达产物为双功能酶,分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明,以α—N—acetyl-Tyr-Val-Gly为底物,该酶催化反应的Km为12.Sμmol/L,Vmax为180μmol/mg/h,而且催化反应中表现有最适铜离子浓度和pH值范围。表达的双功能酶可直接用于合成的多肽和基因工程表达产物的酰胺化加工修饰。 相似文献
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蛋白质及多肽的C端分析 总被引:3,自引:0,他引:3
本文采用(异)硫氰酸化学法,以乙酸酐为活化试剂,四丁铵硫氰酸为偶联试剂,溴甲基萘为烷化试剂,将蛋白质或多肽的C端依次转化并裂解为ATH-氨基酸,在254nm进行检测。分析了若干种天然的、基因工程表达的蛋白质或多肽,测定了不同长度的C端序列,并确证了C端的修饰及突变情况。为蛋白质和多肽的完整性、均一性,基因工程产品及合成多肽的质控提供了重要的C端信息。目前,可在1 ̄2nmol水平上测定了3 ̄5个C端 相似文献
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对新型人白细胞介素-2(IL-2-ser-125)进行了精制和纯度指标的鉴定。蛋白质N端序列分析表明产品中l/3部分N端缺失Met,这种微观不均一性在等电聚焦和毛细管电泳中有所反映。此外,对新型人IL-2的含点突变残基的多肽进行氨基酸序列分析,证实确由Cys-125突变成ser。 相似文献
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本文报道了用液相法合成血清胸腺因子(STF)的结果。由于羧端L-天门冬酰胺羧基采用了对硝基苄基保护,每步均可方便地得到纯度和收率较高的中间肽结晶,最后经催化氢解温和地去除全部保护基获得有生物活性的STF纯品。 相似文献
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将山东省招远市一慢电泳异常血红蛋白( Hb)先证者血及正常人血分离纯化出珠蛋白,脲处理解链,再层析分离并纯化出正常及异常 β链.经胰蛋白酶水解,所得肽片段用 H P L C 分出酶解物中异常肽,此肽经氨基酸组成及顺序测定,表明它同于正常 β链的十九肽 β41→59;异常肽不被 C N Br 作用,将它与正常十九肽通过质谱仪测定质荷比.结果说明异常肽的 β55 M et转变为亚砜型的 β55 M et· O,这转变是此异常 Hb 变异的一级结构基础. 相似文献
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本文介绍了N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐在多肽合成中应用的研究结果。N-保护氨基酸的三级铵盐在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中与N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐反应,先形成N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐酯的活化中间体,然后在第二分子的三级胺的存在下与氨基酸或肽的酯缩合得到N-保护的肽酯。用该试剂进行缩合反应具有反应速度快、缩合率高、副产物容易去除等优点。我们用这个方法合成了一系列二肽衍生物,并用逐步递增法合成了亮氨酸脑啡肽(五肽)。N-保护的氨基酸活化后与胺基组分缩合成肽酯,其收率一般都在85%左右。 相似文献