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确定了在pH 5.2到8.7和温度22°到45℃时钼铁蛋白和铁蛋白的稳定性。按logKm和logV分别对pH作图,得到下列参数。于30℃在酸性侧,乙炔络合常数PK_b(C_2H_2)=6.43—6.50,乙炔催化常数pK_b′(C_2H_2)=4.78,在碱性侧乙炔络合常数pK_a(C_2H_2)=7.42—7.55,乙炔催化常数pK_a′(C_2H_2)=7.88—8.29,氮络合常数pK_a(N_2)=7.75—7.9及氮催化常数pK_a′(N_2)=8.08—8.68。既然pK_a与pK_b或pK_a′与pK_b′二者间隔小于3.5个单位,又按V/Km及V′对pH作图,其结果为pKb(C_2H_2)=6.28pK_a(C_2H_2)=7.68和pK_b′(C_2H_2)=5.53和pK_a′(C_2H_2)=8.93。将不同温度下的pK_b或pK_a分别对各自温度的倒数作图,其热力学数据为由pH 5.7到7.3范围内,质子移变基团的解离热⊿H(ioh)=7742卡/克分子,相应的pK_b(C_2H_2)=6.16—6.36;由pH 7.3到8.4范围内⊿H_(ion)=6983卡/克分子,相应的pK_a=8.24—8.44。这些数据指出固氮酶钼铁蛋白络合乙炔的功能基团可能具有咪唑基·巯基和氨基相类似的结构,这种推测正在用化学修饰的方法加以验证。 相似文献
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金黄色葡萄球菌肠毒素A Asp227Ala基因的克隆及表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:金黄色葡萄球菌肠毒素A Asp227ala基因的克隆及表达。方法:利用错配PCR方法,从含有金黄色葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxn A,SEA)基因的质粒中扩增出约720bp的DNA片段,将其克隆到表达载体7ZTS中,并转化于JM109(DE3)。结果:重组质粒的测序结果表明,它含有702bp(不包括N端72bp的信号肽编码区),其核苷酸序列与文献报道完全一致,推导的氨基酸序列显示227位的天冬氨酸已突变为丙氨酸。结论:该基因所表达的蛋白为可溶性蛋白,表达量占总蛋白51.5%。表达的蛋白与天然肠毒素A产生的抗体能发生凝集作用,具有与天然SEA类同的抗原活性。 相似文献
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IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达。方法:分别在金黄色葡萄球菌肠毒素A227Ala、B基因的两端克隆上两个酶切点Hind Ⅲ,Kpn Ⅰ。将IL-2基因突变,设计一段linker使之分别与SEA227Ala和SEB相连并克隆到PET表达载体中,在大肠杆菌DH5a(DE3)-Pass中表达。结果:表达的蛋白占总蛋白15%。结论:IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合蛋白能在大肠杆菌中有效表达。 相似文献
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利福霉素生产菌产生钝化RifSV物质的分离及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利福霉素SV(简称RifSV)生产菌──地中海拟无枝菌酸菌在生物合成RifSV过程中,产生一种能钝化自身产物(RifSV)的物质.实验证实,该物质是由谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸及缬氨酸等14种常见氨基酸组成的蛋白质.分子量(MW)约2.5×104D,等电点(PI)为5.7—6.1.在100℃下加热10min,其活性丧失.作用于RifSV的最适pH值范围为7.4—8.6,最适温度为29℃,初步证实该物质是一种酶(暂称利福霉素钝化酶) 相似文献
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用改进的重叠PCR引入血管内皮生长因子基因突变 总被引:2,自引:0,他引:2
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的PCR产物克隆于T载体上,经转化JM109感受态菌株后,随机挑取8个白斑菌落,混合后制成混合模板.采用3条引物,做两轮重叠PCR反应,获得了VEGF的突变基因,经PCR鉴定,酶切鉴定和测序分析表明所得基因为目的产物.实践证明这种突变方法简单快速,为下一步实验大量引入突变奠定了实验基础. 相似文献
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用对氯汞苯甲酸或二巯基双二硝基苯甲酸修饰巯基。用三硝基苯磺酸、重氮四唑和焦碳酸二乙酯分别修饰氨基、酚式羟基和眯唑基。在一定范围内,被修饰钼铁蛋白在特征波长吸收值的上升和重组活性的下降与修饰剂用量的增加和时间的延长相一致,超过该范围后则光吸收和活性都保持不变。由于无氧凝胶过滤去除多余的修饰剂时未加连二亚硫酸钠,甚至正常钼铁蛋白的重组活性下降了24.2%,修饰后的铝铁蛋白活性下降范围为23.4~41.4%不等。 相似文献
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