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构建了质粒pBR322和pCRI 的重组质粒——pCBI。已通过转化技术将其送入大肠杆菌,在含有四环素和卡那霉素的培养基中筛选了转化子。在细菌培养液内加入氯霉素使转化子中的重组质粒扩增。采用琼脂糖凝胶电泳法及水溶性两相抽提法纯化重组质粒。重组质粒pCBI 的电泳速度低于两个亲本质粒。用限制酶EcoRI 降解重组质粒,在凝胶电泳上看到两条带,它们的位置分别对应于pBR322线性DNA和pCRI 线性DNA。电镜观察到环状pCBI DNA 并测得其长度为5.77±0.30微米,折合分子量为(11.9±0.6)×10~6道尔顿。 相似文献
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大脑皮层神经元膜蛋白构象改变的ESR研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用马来酰亚胺标记完整的大脑皮层细胞,观察由低氧引起的ESR谱线的变化及脑细胞脂质过氧化程度,低氧引起细胞过氧化物生成增加,膜蛋白构象改变.金属硫蛋白(10-5mol/L)能明显抑制过氧化反应,具有一定的抗氧化作用.并对实验的分子机理进行了简要的讨论. 相似文献
3.
【目的】为害态幼虫现场识别时, 幼虫常出现姿态弯曲情况, 使提取的特征向量失真, 影响幼虫的匹配识别结果。本文提出了一种基于扇形变换的姿态不变胡氏矩特征向量提取方法, 提取的病害幼虫特征向量具有平移、 比例、 旋转和姿态不变性, 可以实现粗短弯曲姿态幼虫的自动识别。【方法】首先在幼虫图像细化的基础上采用最优一致逼近法确定了幼虫的弯曲区域和非弯曲区域。然后, 幼虫的弯曲区域采用扇形变换实现校正变直, 非弯曲区域经旋转和平移与扇形变换后的区域拼接组成完整虫体; 采用八邻域均值法填充变换后虫体区域中的空白点, 实现幼虫像的弯曲自动校正; 在此基础上提取胡氏不变矩具有姿态不变性, 采用最小距离分类器实现了多姿态幼虫的自动识别。最后, 以多种弯曲姿态的斜纹夜蛾Prodenia litura、 棉铃虫Heliocoverpa armigera、 甜菜夜蛾Spodoptera exigua、 玉米螟Ostrinia nubilalis等病害蛾类幼虫为识别对象进行了识别验证。【结果】对于24种不同姿态的幼虫图像, 在80%的识别阈值条件下, 基于经典胡氏不变矩的幼虫识别率为25%, 基于姿态不变胡氏矩的识别率为100%。【结论】实验结果表明该方法对多种弯曲姿态的粗短幼虫具有较高的识别率。 相似文献
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为探讨胰岛素对神经细胞中神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达及活性的影响,应用流式细胞术、原位杂交、电子自旋共振等技术方法研究胰岛素对PC12细胞中神经型一氧化氮合酶的影响.胰岛素作用PC12细胞9 h 后,神经型一氧化氮合酶的免疫荧光强度显著升高,且呈浓度依赖关系,其最大效应为对照的(155±13)%(P<0.01, n=3, t-test).加入胰岛素(16 mU/L, 6 h)也能够显著上调nNOS mRNA的表达,为对照的(182±13)%(P<0.01, n=3, t-test).另外加入胰岛素(16 mU/L)作用9 h后,神经型一氧化氮合酶的活性也显著升高,为对照的(167±15)%(P<0.01, n=4, t-test).由上述结果可知,胰岛素对PC12细胞的神经型一氧化氮合酶的表达及活性有上调作用. 相似文献
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根据顺磁离子Mn~(2+)的取代特性,用EPR方法研究了钙调神经磷酸酶B亚基与其4个Ca~(2+)的结合位点,以及它们亲和力的细微差别。并同时进行了钙调素的对比研究。实验和Scatchard作图表明,B亚基有4个Ca~(2+)结合位点,2个高亲和力结合位点,其解离常数为4×10~(-6)mol/L;2个低亲和力结合位点,解离常数为9×10~(-5)mol/L。钙调素也有2个Ca~(2+)高亲和力结合位点,其解离常数为8×10~(-6)mol/L,2个低亲和力结合位点,解离常数为7×10~(-5)mol/L。钙调神经磷酸酶B亚基和钙调素Mn~(2+)结合位点的EPR研究对B亚基和钙调素在共同调节钙调神经磷酸酶中的作用提供了有用的信息。 相似文献
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单倍体酵母菌株7209-1A(Saccharo-myces cerevisiae)中,含有2微米长的质粒,使用改进的抽提方法能快速简便制备酵母总DNA,用酸酚法或电泳割胶后经玻璃粉吸附法代替氯化铯-溴乙锭密度梯度超离心制备纯的酵母质粒,经电泳、电镜鉴定,该质粒为2.1±0.1微米长,存在两个不相连的反向重复顺序,电镜观察到哑铃状结构,其柄长为0.2±0.03微米,大环约2800bp,小环约2400bp,限制酶Pstl只有一个切点,而EcoRl酶的切点与A364A的完全不同。 相似文献
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假肥大型进行性肌营养不良症(DMD)是一种遗传性肌肉变性疾病。本病在2—3岁发病,表现为行走缓慢,奔跑困难,下蹲后出现严重肌肉乏力,肌腱痉挛萎缩,关节畸形,只能强迫卧床,并于25岁以前死亡。研究该病的发病机制对寻找治疗及预防措施是很有意义的。大量的材料说明,此症患者 相似文献
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金属硫蛋白抗自由基损伤研究 总被引:10,自引:1,他引:9
采用电子自旋共振技术(ESR),以马来酰亚胺自旋标记完整血红细胞和细胞膜,监测氧自由基引起的ESR波谱的变化,研究了不同亚型、不同结合金属的兔肝金属硫蛋白(MT)清除·OH和其对辐射损伤的防护作用。首次观察到四种MT清除·OH及抗辐射的能力与其亚型和结合金属种类有以下顺序的关系:ZnMT_2>ZnMT_1>CdMT_2>CdMT_1。而且还观察到MT对自由基损伤具有修复作用,其作用的强弱和清除·OH的能力大小顺序一致。对实验结果的分子机制进行了某些探讨。 相似文献
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用ESR研究大鼠离体心脏低温长时间缺血后再灌注时产生的自由基,并观察心肌超微结构的变化;对临床心脏直视手术中常用的高钾停跳液的保护作用机理进行了分析。实验结果表明超氧自由基信号强度随缺血温度的降低而明显减弱。高钾停跳液保护的大鼠离体心脏于低温(4℃)缺血后再灌15s,4h内超氧自由基信号强度变化不明显。缺血4h后再灌注,实验组心脏全部于15s内自动复跳,超微结构的变化轻微。以上改变与对照组比较有明显的差异。本实验为低温保存心脏及高钾停跳液的临床应用提供了实验依据。 相似文献