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刘士辉 《国外医学:分子生物学分册》1994,16(4):180-184
纤维蛋白溶解系统与凝血系统活性的动态平衡是维持血液在血管中正常流动的基础。纤溶系统的异常,尤其是PAI-1水平的升高所致的纤溶活性的下降,是血栓性疾病的重要诱因之一。本系统地介绍了纤溶系统的生理作用及其调节,以及它的异常在血栓性疾病发病中的作用。同时介绍了溶栓药物的现状及最新研究方向。 相似文献
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为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAL-1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44~Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。 相似文献
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t-PA突变体工程细胞株FSGGI48形态与其亲代细胞CHO-dhfr相似呈多角形,类似上皮细胞。在MTX加压至5×10~(-6)mol/L时,少数细胞形态略变瘦长,但仍呈多角形,因此该工程细胞株形态正常。抗体中和抑制试验及纤维蛋白板80℃加热试验显示,FSGGI48细胞表达产物与st-PA的活性均能被抗t-PA抗体所抑制,而胰酶的活性则不被抑制,且二者在80℃加热的纤维蛋白板上均不产生溶解圈,胰酶则产生溶解圈,由此可知,该细胞株表达产物为特异的rt-PA产品。细胞无血清培养上清经FA-PA检测,亚克隆株表达水平为4000IU/10~6细胞/24h。分别测定冻存3个月后复苏和体外传代3个月以上细胞的表达水平,结果显示部分亚克隆细胞株表达水平下降,多数仍为3000-4000IU/10~6细胞/24h,说明细胞株稳定性好。裸鼠试验表明,该工程株活细胞、细胞DNA、纯化的细胞表达产物均无致瘤性。支原体检查结果为阴性。染色体分析显示,FSGGI48细胞与其亲代细胞(CHO-dhfr细胞)染色体数目相同均为20条,但均有不同程度不同类型的畸变。CHO-dhfr细胞畸变率为6%。该工程细胞的畸变率为15%-18%,在允许范围内。结果证明,t-PA突变体细胞株FSGGI48为性能优良的工程细胞株。 相似文献
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鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片段的人源化分子 总被引:1,自引:0,他引:1
产生免疫原性的残基主要是位于蛋白表面的暴露残基,为了消除鼠抗体对人的免疫原性,利用表面再塑的方法对本室克隆的鼠抗人纤维蛋白抗体链Fv片段进行了人源化分子设计。首先确定了鼠及人Fv片段的表面残基,在此基础上分析了鼠与人抗体Fv表面残基的差异,将存在差异的鼠抗体表面残基换成人的,从而实现鼠抗体的人源化。 相似文献
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为了得到t—PA组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达,将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子(enhancer)去除.构建了FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。酶切线性化后.采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr-)。氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞,混合加压.挑选克隆。在1×10-7mol/L MTX压力下。获得表达水平达1 500~2500Iu/106细胞·24h的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好.倍增时间约为36h.且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。 相似文献
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序列分析中发现tPAK2编码区结构基因中存在一段反转重复序列,富含G、C。利用计算机预测tPAmRNA二级结构证明tPAmRNA在此处可以形成△Gm=-25.5KCal/mol的发夹结构。本研究利用定点突变技术消除了这段反转重复序列,在大肠杆菌中进行了消除前后tPA转录和翻译水平的比较。结果表明消除之后,细菌总RNA中tPA特异mRNA含量减少,细菌表达产物中tPA蛋白占破菌沉淀物的百分比却基本不变。提示大肠杆菌中基因编码区mRNA二级结构一般不构成转录的终止,但有利于mRNA的稳定性,对翻译表达无影响。 相似文献