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重组蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的影响因素 总被引:8,自引:0,他引:8
高效表达重组蛋白 ,对于生物制药意义重大。大多数药用蛋白是糖蛋白 ,中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell,CHO)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系。影响外源蛋白在CHO细胞中表达的因素很多 ,从CHO细胞表达体系、表达载体系统、外源基因、表达细胞株的加压扩增与筛选、细胞大规模培养等方面对CHO高效表达加以阐述 ,同时提出存在的问题和未来的发展方向。 相似文献
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根据已报告的传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)cDNA序列,设计引物,用RT-PCR扩增CH(鸡)、DU(鸭)、GE(鹅)和SP(麻雀)四种不同源IBDV分离株的vp2基因高变区.核酸序列测定分析表明,四种不同源IBDV分离株vp2基因高变区的同源性为97%,推导编码蛋白氨基酸序列的同源性98%,两个亲水区和七肽区的氨基酸序列完全一致.本研究结果提示,自然感染IBDV的鸭、鹅和麻雀不仅可成为病毒携带者或传染源,而且在病毒变异中起一定作用. 相似文献
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用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因 总被引:2,自引:0,他引:2
以PCR技术扩增含有PreC信号肽序列及完整的HBeAg基因的序列(即HBcAg基因5′端447bp),在5′端加上合适的酶切位点,克隆到家蚕核多角体病毒转移载体pBm030上,与野生型BmNPVDNA共转染家蚕BmN细胞,空斑纯化后得到多角体基因失活的重组病毒。ELISA法测定表明培养液上清中HBeAg效价达1∶32000,细胞内HBeAg效价为1∶2000,培养液及细胞内的HBcAg含量极低(<1∶160)。研究结果表明,BmN细胞能正确识别与切割HBeAg信号肽序列,所表达的HBeAg效价高,纯度好,明显优于大肠杆菌表达系统 相似文献
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家蚕BmN细胞的微载体培养及HBeAg的高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
选择微载体Cytodex3对家蚕BmN(从SilkwormBombyxmori获得的细胞系)细胞进行高密度培养,并获得成功。观察了家蚕BmN细胞在微载体Cytodex3上的贴壁分布,研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况,并筛选出最佳的技术参数。在1000mL滚瓶中用微载体Gytodex3培养家蚕细胞,在合适的培养条件下(细胞接种浓度3.6×105细胞/mL、微载体浓度5g/L),5d后,细胞的终密度达到2.8×106细胞/mL,细胞增长指数为7.9。在细胞指数生长期(传代后48~60h)用载有HBeAg基因的重组病毒(rBmHBe)接种(感染量为0.4PFU/细胞),5d后,培养上清中HBeAg滴度为1∶9.6×104,是用方瓶静止培养的家蚕细胞表达量的3倍。 相似文献
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为建立稳定表达人可溶性B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,从人胎盘cDNA文库中扩增hsBLyS基因,将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和hsBLyS基因重叠延伸为融合基因;融合基因分别插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSVdhfr,共转染CHOdhfr细胞;选择培养液筛选,经氨甲喋呤选择压力扩增表达,获稳定表达hsBLyS的细胞系,表达量由0.13μg/ml上升至0.55μg/ml;同时利用pEFneo/hsBLyS重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测结果表明小鼠产生hsBLyS的特异性抗体。本实验建立了稳定表达hsBLyS的CHO细胞系,对其基因免疫小鼠抗体产生的特点做了初步探讨,为hsBLyS进一步研究奠定了良好的基础 相似文献
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目的:制备兔抗人富含半胱氨酸蛋白(Cyr61)多克隆抗体,并用该抗体检测Cyr61蛋白在重度子痫前期(PE)和正常妊娠胎盘中的差异表达.方法:用RT-PCR法从Hela细胞中克隆Cyr61全长mRNA,并在大肠杆菌中表达获得重组蛋白,免疫新西兰白兔得到兔抗人Cyr61多克隆抗体.然后用此抗体对14例重度子痫前期胎盘进行检测,并与孕周匹配的14例正常胎盘比较.结果:Cyr61DNA测序结果与参考序列一致;Western blot竞争法证实制备的兔抗Cyr61抗体与商品化的羊抗Cyr61抗体有共同的靶点;用制备的兔抗人Cyr61蛋白抗体Western blot检测发现,在重度PE胎盘中Cyr61蛋白含量较正常胎盘含量降低(14.2±1.0 vs.29.2±1.1 P<0.05).结论:本研究成功地在大肠杆菌中表达出Cyr61融合蛋白,并制备了特异性高的兔抗人Cyr61抗体.重度PE胎盘中Cyr61蛋白表达水平降低. 相似文献
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用微载体技术培养家蚕BmN细胞的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
观察了家蚕BmN(从silkworm Bombyxmori获得的细胞系)细胞在微载体cytodex3上的贴壁分布,提出其分布符合Poisson规律.并由此估计了不同细胞接种浓度时裸球的百分比.与实际观测结果基本符合;研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况,家蚕BmN细胞在Cytodex 3上生长的临界接种数为一珠粒6.4个细胞。当微载体浓度为3 g/L时,最低的接种浓度为1.O×105/ml。 相似文献
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