大白菜EST-SSR反应体系优化及引物筛选

 探讨了大白菜EST-SSR反应体系的优化,利用优化的体系筛选部分引物。采用L16(44)正交设计,研究各主要参数的适宜浓度,建立适合大白菜EST-SSR反应的最佳体系。结果表明,各因素不同水平浓度对扩增结果均有一定影响,其中以引物浓度影响最大,其次是dNTP和Taq DNA聚合酶,最小是模板DNA用量。优化后的最佳体系（20?滋L）为：引物浓度1.0μmol/L,dNTPs 0.25mmol/L,Taq酶0.5U,模板DNA 70ng。利用优化的体系,根据大白菜EST序列设计引物126对,分别以2对抗、感病毒病的大白菜材料的基因组DNA为模板进行扩增,筛选出至少在一份材料中扩出多态性的引物19对。该优化体系可用于大白菜EST-SSR扩增,初步筛选的引物可用于大白菜病毒病分子标记的进一步研究。     

利用ELISA方法鉴定大白菜TuMV抗性

为了准确鉴定大白菜分离群体中各个单株的TuMV抗/感特性,采用美国Agdia公司的TuMV检测试剂盒,利用ELISA方法,对接种后的抗、感材料和F2代单株进行检测.结果表明,对抗病材料和感病材料,ELISA检测结果与其抗性表现基本一致,能明显区分出抗病和感病.但对发病较为严重的高感病毒病材料,ELISA检测结果却为阴性.绝大多数F2代的ELISA检测结果能够说明各个单株的抗/感特性.利用ELISA方法还能对某些单株的抗/感特性进行提前预测.因此,ELISA方法可作为大白菜TuMV抗病性鉴定的有利辅助手段.