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目的 阐明鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化核转录因子NF κB的机制。方法 利用强力霉素Dox诱导表达LMP1的鼻咽癌细胞株Tet on LMP1 HNE2为实验模型 ,首先应用免疫印迹方法测定Dox诱导后不同时相LMP1的表达动力学以及IκBs蛋白量及功能的改变。进而用间接免疫荧光法检测NF κB的亚细胞定位。最后采用瞬间共转染及报道基因活性分析分析NF κB的活性。结果 在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,Dox处理 15分钟后LMP1的表达迅速升高并维持与较高水平直至 12 0分钟。LMP1的诱导性表达导致IκBα的磷酸化并降解 ,但IκBα蛋白总量无改变。继IκBα的磷酸化并降解 ,NF κB(P6 5 )自胞浆易位至胞核且活性升高。IκBα的显性负性突变子抑制NF κB(P6 5 )的核易位及报道活性。LMP1的诱导性表达并未引起IκBβ蛋白水平变化。结论 在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,EB病毒LMP1通过IκBα的磷酸化并降解激活核转录因子NF κB的活性 ,并且 ,LMP1诱导的NF κB活性能被IκBα的显性负性突变子完全抑制。IκBβ在此信号传导途径中无改变。LMP1表达前后IκBα蛋白总量维持恒定可能是由于NF κB的活化迅速启动了IκBα的重头合成这一自身调节环路所致。 相似文献
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耐长春新碱视网膜母细胞瘤细胞株的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:研究视网膜母细胞瘤获得性多药耐药现象,探讨其产生机制。方法:利用长春新碱(vincristree,VCR)对人视网膜母细胞瘤细胞系HXO-RB44细胞在体外进行浓度递增法逐步诱导实验,建立一株耐长春新碱视网膜母细胞瘤细胞亚株HXO—RB/VCR。并对其细胞生长,药物含量,药物敏感性与放射性敏感性进行检测。
结果:该耐药细胞株HXO—RB/VCR细胞对长春酰胺、丝裂霉素C、阿霉素、足叶乙甙、顺铂、卡铂等有交叉耐受,对卡氮芥、氟尿嘧啶无明显抗药性,而对氨甲喋呤的敏感性反而增加。对60 Coγ射线有轻度耐受性。细胞内药物含量测定显示:耐药细胞内长春新碱浓度明显低于敏感细胞,钙通道阻断剂异博定可使细胞内VCR浓度增加,部分逆转其耐药性。
结论:VCR可诱导视网膜母细胞瘤产生多药耐药和轻度放射耐受,获得性多药耐药作用可被异博定逆转。
(中华眼底病杂志,1997,13:6-9) 相似文献
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目的:探讨上调p16基因的表达对鼻咽癌细胞恶性表型逆转的作用,为p16基因在鼻咽癌发病过程中具有一定的作用提供直接的证据.方法:本文采用电穿孔的方法向p16基因表达下调的鼻咽癌细胞系HNE1中导入全长野生型的p16cDNA,通过G418筛选获得可以稳定传代的转染细胞系.对其中4个转染细胞系以PCR和Northern杂交鉴定转染细胞系中外源p16cDNA整合以及p16基因表达的状况.并借助比较细胞倍增时间,流式细胞计数和裸鼠接种的方法对转染细胞的恶性表型进行了检测.结果:在所鉴定的4个转染细胞系中有一个转染细胞?#4-2)不仅整合了外源p16cDNA,且p16基因的表达明显增高.与未转染的鼻咽癌细胞系HNE1及未整合外源p16cDNA的转染细胞系相比,#4-2细胞的倍增时间延长,停滞于G1期的细胞数明显增多,接种裸鼠后肿瘤形成的潜伏期延长.结论:以上实验结果证实p16基因在鼻咽癌的发生过程中确实具有一定的作用,它的表达上调可以促进鼻咽癌细胞恶性表型的逆转. 相似文献
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EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进IL-8分泌 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨EB病毒LMP1分子致瘤机制,在已证实鼻咽癌细胞系中LMP1有效激活NF-κB 或AP-1的基础上,对LMP1是否通过NF-κB 或AP-1促进IL-8分泌进行探讨。方法:以稳定表达LMP1及其3种突变体,空白载体的鼻咽癌细胞系[HNE2-LMP1,NHE2-MLP1(1-185),HNE2-LMP1(1-231),HNE2-LMP1Δ187-351和HNF3-pSG5]及antisense-LMP1处理的HNF2-LMP1鼻咽癌的细胞系为材料,将IL-8报道质粒瞬时导入这些细胞系中,通过测定luciferase值以反映LMP1是否促进IL-8转录;将mut AP-1/IL-8-luc或IκB α(S32A/S36A)表达质粒导入HNE2-LMP1细胞系中,比较其IL-8报道活性,以确定LMP1是否通过AP-1或NF-κB 诱导IL-8转录;利用ELISA方法测定HNE2-LMP1,HNE2-pSG5,anti-sese-LMP1处理的HNE2-LMP1鼻咽癌细胞系中的IL-8浓度,进一步从蛋白水平上确定LMP1是否促进IL-8分泌。结果:与HNE2-pSG5相比,在HNE2-LMP1,HNE2-LMP1Δ187-351和HNE2-LMP1(1-231)细胞系中IL-8报道活性分别升高了原来水平的11.5,8.6和3.4倍,而HNE2-LMP1(1-185)对IL-8报道活性不影响。在HNE2-LMP1细胞系中IL-8蛋白水平提高了17.4倍,而antisense-LMP1则使HNE2-LMP1细胞的IL-8报道活性及蛋白水平分别下降到原来水平的18.3%和9.2%,导入mutAP-1/IL-8-luc或IκBα(S32A/S36A)的HNE2-LMP1细胞中IL-8报道活性分别下降到原有水平39%和26%,结论:鼻咽癌细胞系中LMP1可能通过NF-κAP-1促进IL-8表达。 相似文献
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总结了人体上皮细胞的原代培养方法,详述了组织块培养法,单细胞分离培养法、成纤维细胞清除法及其关键技术,如以冷胰蛋白酶消化法制备各种上皮细胞悬液,用机械刮除加酶消法清除成纤维细胞。本资料有助于基础医学研究及在临床应用中获得理想的研究材料。 相似文献
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目的和方法 :肿瘤是一种细胞周期病。D型周期素是调节细胞周期G1 /S期进展的重要正性调节因子 ,包括D1、D2及D3三个亚型 ,尤其是D1已被证实是一种候选瘤基因。我们先前的研究已首次在鼻咽癌活检组织中建立了D型周期素的表达谱 ,发现D型周期素在鼻咽癌活检组织中呈差异性表达。新近的研究表明 ,在B淋巴细胞中EB病毒潜伏膜蛋白LMP1能诱导D2的表达 ,协同D1调节G1 期行进。因此 ,在此基础上 ,本文利用Westernblotting方法进一步检测了EBV -LMP1 ( )及 ( - )的鼻咽癌细胞系CNE -LMP1、HNE1中… 相似文献
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LMP1通过Survivin抑制60Co诱导鼻咽癌细胞凋亡 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)介导凋亡抑制蛋白 (Survivin)表达对辐射效应的影响。方法 利用LMP1可调控表达鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 )诱导LMP1表达 ,同时 60 Co照射 5Gy ,采用形态学观察、流式细胞术和半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)活性检测等方法 ,分析LMP1表达对60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响。用反义Survivin寡核苷酸阻断Survivin表达 ,观察Sur vivin表达阻断对60 Co辐射效应的影响。结果 LMP1表达抑制60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡 ,LMP1表达60 Co照射组形态学和流式细胞术检测凋亡率 (32 .7%± 2 .1% ,6 .3% )明显低于LMP1表达阴性组 (6 6 .0 %± 3.0 % ,2 9.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;转染Survivin反义寡核酸后细胞凋亡率 (5 9.3%± 3.2 % ,3.0 % )明显高于对照组 (2 6 .0 %± 2 .6 % ,8.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;同样转染Survivin反义寡核酸组Caspase 3活性 (3.78nmol/ 10 6)高于对照组 (2 .79nmol/ 10 6)。结论 提示LMP1通过介导Survivin表达而抑制60 Co照射诱导凋亡 ,Survivin反义核酸协同辐射诱导肿瘤细胞凋亡 ,Survivin作为增敏放射治疗靶 ,具有潜在的临床意义。 相似文献
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茶多酚诱导鼻咽癌细胞cyclin D1表达下调 总被引:16,自引:1,他引:15
目的:探索茶多酚及其单体抑制鼻咽癌增殖的分子机制。方法:应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪、报告基因和Western blot分析等方法,研究茶多酚及其单体对细胞增殖和细胞周期的影响及分子机理。结果:茶多酚处理鼻咽癌细胞CNE1-LMP124h后,从裂相细胞显著减少,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率从100%下降到38.1%(200μg/ml);S期细胞明显减少,从22.20%下降至13.16%(200μg/ml) ,G0/G1细胞所占百分率增加,从68.50%上升至74.08%,细胞出现G1/S阻滞,同时,cyclinD1基因启动子转录活性显著下调,与对照组比下降4-5倍,但相同浓度的茶多酚与(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)处理没有显著性差别,cyclinD1蛋白表达水平明显降低,采用荧光酶双报告基因系统分析,发现茶多酚处理12-14h后,AP-1、NFkB反式激活活性均匀显著下降,与对照组(0μg/ml)比分别下降5-6倍、7-8倍,且呈明显量效关系。结论:茶多酚能抑制鼻咽癌细胞CNE-LMP1增殖,茶多酚诱导致cyclinD1基因的转当和表达下调可能在其中起着重要作用。 相似文献
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视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb_(44)化疗敏感性及多药耐药性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44进行11种不同类抗癌药物的敏感性测试,显示该细胞系存在多药耐药现象。该细胞系在手术取材前及培养过程中,未接触过任何抗癌药物,提示这种多药耐药现象为该肿瘤细胞固有的。本研究为进一步探索视网膜母细胞瘤的化疗抗性,寻找新的抗癌靶点提供了理论依据。 相似文献
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研究汉防己甲素(Tetrandrine,TDR)对人视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性的影响,发现TDR在低剂量(0.1μg/ml)时,虽对Rb细胞无直接抑制作用,但可明显增加放射线对Rb细胞的杀伤作用。随着药物浓度的增加,细胞杀伤率增高。放射前后给药无明显差别。TDR主要通过抑制细胞的潜在致死性损伤的修复增加放疗效果。 相似文献