重症急性胰腺炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶的表达与肺毛细血管内皮屏障损伤

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK）在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠肺组织中的表达情况,并初步探讨p38MAPK与SAP肺毛细血管内皮屏障损伤的关系。方法将40只健康雄性SD大鼠随机（随机数字表法）分为假手术（SO）组和SAP组,SAP组又再分为3、6、12及24 h 4个时间点组,共5组,每组8只。采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP大鼠模型。采用HE染色方法观察大鼠肺和胰腺组织的病理学改变;采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平;采用免疫组化染色方法检测肺组织中磷酸化p38（p-p38）蛋白和水通道蛋白1（AQP1）的表达水平;采用实时定量荧光PCR法（real-time PCR）检测肺组织中AQP1 mRNA的表达水平。结果 SAP各时间点组大鼠肺组织充血水肿,炎症细胞浸润;胰腺组织可见大片坏死,部分腺叶结构模糊甚至消失;血清TNF-α和IL-1β水平均较SO组高（P〈0.05）。SO组大鼠肺组织中p-p38蛋白仅有微量表达,而在SAP3 h组,p-p38蛋白的表达就明显上调,在6 h时达高峰,24 h时仍高于SO组（P〈0.05）。SAP各时间点组大鼠肺组织中AQP1 mRNA及其蛋白的表达水平均较SO组下降（P〈0.05）,并随着时间的推移而逐渐下降;SAP组大鼠AQP1 mRNA的表达与TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之间均存在负相关关系（r=-0.87,P〈0.05;r=-0.88,P〈0.05;r=-0.78,P〈0.05）。结论肺组织中AQP1蛋白表达的下调是SAP肺毛细血管内皮屏障损伤的重要原因之一,其可能与p38MAPK的激活及炎症因子的过度释放有关。     

结肠癌T-cadherin表达水平分析与5-Aza-CdR对其表达和结肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

背景与目的：结肠癌是临床常见恶性肿瘤,探讨抑癌蛋白T-cadherin在结肠癌中的表达情况及其与患者临床病理学特征的关系,并分析5-Aza-CdR对T-cadherin表达和结肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法：收集福建医科大学附属第二医院2015—2016年40例手术切除的结肠癌组织及癌旁组织新鲜样本,并经过病理学检查验证,分别提取总RNA和总蛋白质。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）分析T-cadherin mRNA的表达,采用蛋白质印迹法（Western blot）分析T-cadherin蛋白水平,并分析T-cadherin的mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。进一步以人结肠癌细胞系HT-29为研究对象,采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理HT-29细胞,分别采用RTFQ-PCR和Western blot分析T-cadherin表达变化,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）分析细胞增殖,采用Transwell实验验证细胞侵袭能力,采用流式细胞术分析细胞凋亡。结果：T-cadherin在结肠癌组织的蛋白水平和mRNA表达均明显低于癌旁组织,其mRNA表达与淋巴结转移（F=5.316,P=0.009 3）和分化程度（F=5.807,P=0.006 4）明显相关,而与其他病理变量（包括性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤浸润深度）无明显相关。药物5-Aza-CdR可以显著上调HT-29细胞中T-cadherin的表达水平,抑制HT-29细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡。结论：T-cadherin表达可能与结肠癌恶性程度密切相关,药物5-Aza-CdR处理可上调结肠癌细胞T-cadherin的表达,并抑制结肠癌细胞的增殖、迁移,促进结肠癌细胞凋亡,提示T-cadherin可能是结肠癌患者使用甲基化抑制剂5-Aza-CdR治疗的靶点。     

结肠切除对青紫兰兔结肠黏膜中5-HT、CgA阳性细胞的影响

目的 初步研究结肠切除对青紫兰兔结肠黏膜中5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)及嗜铬粒蛋白A(chromogranin A,CgA)阳性细胞数量变化的影响.方法 选取15只青紫兰兔,切取结直肠交界上段结肠7～8 cm长(对照组),继续饲养2周后处死动物,取吻合口处结肠段(研究组).免疫组化法检测2组结肠黏膜中的5-HT阳性细胞及CgA阳性细胞,观察其数量的变化.结果 对照组与研究组结肠黏膜中的5-HT阳性细胞数分别为(10.40±2.22)个及(26.27±2.35)个,CgA阳性细胞数分别为(20.60±5.34)个及(51.51±6.13)个,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 结肠切除可引起兔结肠黏膜中5-HT及CgA阳性细胞数量的增多.     

直肠癌保肛术后排便功能障碍研究进展

行直肠癌保肛术,术后易出现排便功能障碍,其发生机制的研究,近年来已取得很大进展。术中肛门内扩约肌损伤,直肠肛管感觉神经受损;术后直肠最大耐受量及顺应性改变,肛管直肠角、乙状结肠角改变,排便自制反射神经通路损伤都可能导致排便功能发生改变,甚至长期无法恢复。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后在多脏器的分布

背景：利用绿色荧光蛋白转基因小鼠间充质干细胞自身携带荧光性的特点,干预重症急性胰腺炎大鼠后,便于动物体内跟踪观察。目的：观察绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞在重症胰腺炎大鼠体内各脏器的分布情况。方法：直接贴壁法分离培养绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,90%融合后消化传代扩增。传至第3代后行CD29＋、CD90＋、CD34-、CD45-细胞免疫表型鉴定。显微镜下逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠制造SD大鼠重症急性胰腺炎模型。1h后,按2×106/只尾静脉注入重症急性胰腺炎SD大鼠体内。分别于6,12,24h取肝、肾、脑、肺、胰、肠脏器送普通病理检查,观察胰腺病理变化及骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎SD大鼠后在各脏器干细胞分布情况及灰度值测定。结果与结论：胰腺破坏随时间延长而加强,24h破坏最严重;GFP小鼠CD29阳性细胞91.1%,CD90阳性细胞93.5%,CD34阳性细胞0.82%,CD45阳性细胞2.22%;注射干细胞SD大鼠各脏器均有绿色荧光出现,并随时间增长而增强;在肾脏组织中灰度值最高,脑组织最少。提示骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后能在各脏器稳定分布。     

基于癌症基因组图谱数据分析的食管鳞癌免疫微环境预后基因的鉴定

目的基于癌症基因组图谱(TCGA)数据分析, 识别鉴定食管鳞状细胞癌免疫微环境中的预后基因。方法利用TCGA数据库下载94例食管鳞状细胞癌(ESCC)患者的表达谱和临床病理信息, 采用ESTIMATE算法计算免疫评分和基质评分。通过分析不同临床病理特征下的免疫/基质评分与患者生存预后的关系, 鉴定出ESCC的预后基因。随后对这些差异表达基因(DEGs)进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)的分析。在此基础上进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析, 最终通过临床样本检测对DEGs进行验证。Kaplan-Meier生存分析法计算DEGs与生存时间的关系, 双尾t检验比较免疫/基质评分。结果食管鳞癌患者的预后与淋巴结转移相关的免疫和基质评分有关, 免疫评分高组的患者存活率低于免疫评分低组(P>0.05), 高基质评分组的患者存活率明显低于低评分组(P<0.01)。本研究根据免疫/基质评分筛选223个差异表达基因, 采用GO和KEGG分析表明所选基因主要与细胞膜、免疫反应和炎症反应有关, 共鉴定出68个与预后相关的基因。利用PPI网络分析验证了CD86、...     

补中益气汤对兔结肠黏膜5-HT、CgA阳性细胞数的影响

目的：通过观察补中益气汤联合易蒙停对结肠黏膜5-羟色胺（5-HT）、嗜铬粒蛋白A（CgA）阳性细胞数的影响,探讨补中益气汤联合易蒙停治疗结肠切除术后排便障碍的作用机理。方法：切除青紫蓝兔结肠后,分别给予补中益气汤、易蒙停及两者联合治疗14d,处死后取吻合口处结肠。免疫组化法检测每组切除后正常结肠、吻合口处结肠黏膜中5-HT、CgA阳性细胞。结果：正常组、术后空白对照组、西药组、中药组、中西医药组5-HT阳性细胞数分别为10.40±2.22,26.27±2.35,18.20±2.71,15.93±2.46,14.33±2.87;CgA阳性细胞数分别为20.60±5.34,51.51±6.13,36.10±5.34,28.36±7.16,29.33±8.17。中药组与中西药组比较无差异（P〉0.05）,余各组间比较有差异（P〈0.01或P〈0.05）。结论：补中益气汤联合易蒙停致结肠切除后青紫蓝兔结肠黏膜5-HT、CgA阳性细胞数的减少,可能是其治疗结肠切除术后排便障碍的作用机制之一。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗重症急性胰腺炎相关肺损伤

背景：目前骨髓间充质干细胞移植治疗各种炎症性疾病研究甚多,但在重症急性胰腺炎相关器官损伤干预方面研究甚少。目的：观察同种异体骨髓间充质干细胞移植对重症急性胰腺炎相关肺损伤大鼠的干预作用。方法：采用全骨髓差异贴壁法培养获得骨髓间充质干细胞。100只SD大鼠随机取32只为假手术组,仅翻动轻柔胰腺;另68只制作重症急性胰腺炎肺损伤动物模型,并分为干预组和对照组,每组再分为4个时间点。分别经尾静脉注入1×109L-1浓度骨髓间充质干细胞悬液和同体积生理盐水。干预组每个时间点随机取1只注射CM-DiI标记的骨髓间充质干细胞悬液用于细胞示踪研究。结果与结论：逆行胆胰管注射建模能早期诱发重症急性胰腺炎及相关肺损伤,炎症因子及E-选择素表达明显增高,并且胰腺和肺的损伤程度随时间延长而加重;移植荧光标记的干细胞后肺组织可见红色荧光出现,并随时间增长而增多;干预组肺组织损伤情况均较对照组各时间点减轻,血清淀粉酶及炎症递质肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β较对照组各时间点下降。干预组肺组织中E-选择素表达较对照组下降。提示同种异体骨髓间充质干细胞移植能有效保护肺血管内皮细胞,减轻重症急性胰腺炎相关肺损伤。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗重症急性胰腺炎相关肺损伤

背景：目前骨髓间充质干细胞移植治疗各种炎症性疾病研究甚多,但在重症急性胰腺炎相关器官损伤干预方面研究甚少。 目的：观察同种异体骨髓间充质干细胞移植对重症急性胰腺炎相关肺损伤大鼠的干预作用。 方法：采用全骨髓差异贴壁法培养获得骨髓间充质干细胞。100只SD大鼠随机取32只为假手术组,仅翻动轻柔胰腺;另68只制作重症急性胰腺炎肺损伤动物模型,并分为干预组和对照组,每组再分为4个时间点。分别经尾静脉注入1×10⁹ L^-1浓度骨髓间充质干细胞悬液和同体积生理盐水。干预组每个时间点随机取1只注射CM-DiI标记的骨髓间充质干细胞悬液用于细胞示踪研究。 结果与结论：逆行胆胰管注射建模能早期诱发重症急性胰腺炎及相关肺损伤,炎症因子及E-选择素表达明显增高,并且胰腺和肺的损伤程度随时间延长而加重;移植荧光标记的干细胞后肺组织可见红色荧光出现,并随时间增长而增多;干预组肺组织损伤情况均较对照组各时间点减轻,血清淀粉酶及炎症递质肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β较对照组各时间点下降。干预组肺组织中E-选择素表达较对照组下降。提示同种异体骨髓间充质干细胞移植能有效保护肺血管内皮细胞,减轻重症急性胰腺炎相关肺损伤。     

环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的 探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制.方法 健康雄性SD大鼠72只,按完全随机法分为假手术(SO)组、重症急性胰腺炎组(SAP组)、SAP+ H89(cAMP抑制剂)组,后两组按取材时间不同又分为3、6、12及24 h四个亚组,共9组,每组8只.采用酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、IL-1β,同时观察胰腺和肺组织的病理变化,免疫组织化学蛋白方法检测cAMP依赖PKA催化亚基C(PKA C)和磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白(p-VASP),荧光定量聚合酶链反应检测肺组织VSAP mRNA表达水平.结果 与SO组比较,SAP组各时间点血清TNF-α 、IL-1β明显上升(P＜0.05),胰腺、肺病理学改变明显,肺组织PKA C蛋白、VASP磷酸化水平及VASPmRNA表达水平明显增强(P＜0.05),12 h达高峰[TNF-α(266.07±17.14) pg/mL、IL-1β (169.17±25.92) pg/mL、PKA C(210.69 ±6.32)×103、p-VASP(56.62 ±0.57)×103、VASPmRNA(2.06 ±0.21)],且与TNF-α、IL-1β之间存在明显的正相关性.与SAP组比较,SAP+ H89组各时间点胰腺、肺病理学改变明显减轻,肺组织PKA C蛋白、VASP磷酸化水平及VSAP mRNA表达水平明显下降(P＜0.05).结论 cAMP/PKA信号转导通路的活化参与了重症急性胰腺炎肺损伤的病理过程,可能与TNF-α及IL-1β水平上调及VASP磷酸化而发挥作用有关.