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目的摸索一种适合于中试生产的重组人干细胞因子(recombinant human stem cellfactor,rhSCF)的发酵表达与纯化工艺.方法研究不同培养基和热诱导时间对rhSCF表达量影响;探索最佳纯化工艺和各因素对rhSCF得率和生物学活性的影响.结果rhSCF工程菌在含甘油、酪蛋白水解物、酵母浸出粉、胰蛋白胨及微量元素的培养基中表达量最高.灰度扫描显示热诱导后2 h开始表达,6 h表达量最高,目的蛋白约可达菌体总蛋白30%.高表达蛋白经复性后,可用酸沉淀作粗分离纯化,随后用阳离子交换层析分离,纯度达80%,经反相层析去除二聚体后,最后用DEAE柱浓缩后并经S200转换缓冲液,最终获得纯度＞95%和比活性＞6×105 U/mg的rhSCF制品.结论成功地建立了注射用rhSCF的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验奠定基础. 相似文献
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